AMPPD发光显色试剂盒操作步骤_技术交流_仪器仪表技术文献

AMPPD发光显色试剂盒操作步骤

提供者：森贝伽（南京）生物科技有限公司发布时间：2014/12/17 13:05:39 阅读次数：267次进入该公司店铺

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AMPPD发光显色试剂盒操作步骤
自备材料：
1、转印了蛋白并已以抗体-酶复合物检测过的PVDF 膜
2、Tris 盐缓冲液（TBS）
3、透明的塑料保鲜膜
4、蒸馏水
操作步骤（仅供参考）：
1、临用前，取适量的A1 和A2，等量混合后获得Dioxetane Buffer。
2、按 2.5mgAMPPD 溶于25ml Dioxetane Buffer, 配制0.1mg/ml AMPPD 底物溶液即为AMPPD Dioxetane Buffer（发色发光显迹液），用于膜的染色。
3、取适量Dioxetane Buffer 洗膜两次，每次15min。
4、对于 PVDF 膜进行的碱性磷酸酶反应, 膜置于新鲜配制的AMPPD Dioxetane Buffer作用5min。
5、将膜移入适量的AMPPD Dioxetane Buffer 中，浸泡5min（AP 反应）。
6、取出 PVDF 膜，滴干水分，将膜正面朝下放在一张透明的塑料保鲜膜上，向后折叠将膜包裹起来，成为不漏水的封闭体。
7、在暗房中，将膜正面朝下放在感光胶片上，曝光数秒至数小时。
8、如需要，在室温下以适量的TBS 洗膜15min。
9、将膜放入AMPPD Dioxetane Buffer，条带应在10~30min 内出现。
10、用蒸馏水洗膜，终止反应。晾干后拍照留永久的记录。
注意事项：
1、PVDF 膜置于胶片上后，不要改变位置。
2、曝光时间应根据实验情况，自行摸索。
3、配制好的AMPPD Dioxetane Buffer，应避光低温保存。
4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期： 12 个月有效。
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