1. 血清：室温血液自然凝固10-20 分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上 清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心

20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次 离心。

3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程 中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000 转/

分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞

浓度达到100 万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20 分 钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备 用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器 将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待 检测，其余冷冻备用。

6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上 进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.

7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 操作步骤

1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标 准品100µl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50µl，混匀；然后从第一孔、第二 孔中各取100µl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50µl， 混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50µl弃掉，再各取50µl分别加到第五、第六孔 中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各 取50µl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50µl，混 匀后从第七、第八孔中分别取50µl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准 品稀释液50µl，混匀后从第九第十孔中各取50µl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50µl， 浓度分别为90 pg/mL，60 pg/mL，30 pg/mL，15pg/mL，7.5 pg/mL）。

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样 品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40µl，然后再加待测样品10µl（样 品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混 匀。

4. 配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此 重复5次，拍干。

7. 温育：操作同3。

8. 洗涤：操作同5。

9. 显色：每孔先加入显色剂A50µl，再加入显色剂B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色

15分钟.

10. 终止：每孔加终止液50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止 液后15 分钟以内进行。