第一步增菌培养：用Half-Fraser肉汤，30℃培养24h

第二步增菌培养：用Fraser肉汤，从Half-Fraser肉汤中取0.1ml培养液加入10ml Fraser肉汤中,35℃培养24-48小时。

选择性分离培养

取0.1ml 30±2℃培养24h Half-Fraser肉汤培养物，划线接种到PALCAM平板上， 35℃培养24-48小时，检查有无黑色菌落，并菌落外围有黑色环。 Fraser肉汤培养24小时，出现明显黑色，取0.1±0.02ml培养物接种到MOX平板上35℃至少培养24小时，若Fraser肉汤培养24小时，没有出现明显黑色，继续培养至48小时，出现明显黑色，取0.1ml培养物接种到PALCAM平板上35℃至少培养24小时。若培养48小时，仍没有出现明显黑色，并在PALCAM上没有可疑菌落，则此样品为单增李斯特氏菌阴性。

ISO方法中，增菌培养采用二步增菌培养法，并可通过增菌液的颜色变化来判断有无李斯特氏菌，所采用的增菌培养基为Half-Fraser 肉汤和Fraser肉汤。所用的分离平板为PALCAM培养基。本方法几乎可用于所有食品中李斯特氏菌的检测。