交联葡聚糖凝胶
商品名
SephadexG交联葡聚糖的商品名为Sephadex,同规格型号的葡聚糖用英文字母G表示,G后面的阿拉伯数为凝胶得水值的10倍。例如,G-25为每克凝胶膨胀时吸水2.5克,同样G-200为每克干胶吸水20克。交联葡聚糖凝胶的种类有G-10、G-15、G-25、G-50、G-75、G-100、G-150、和G-200。因此,“G”反映,凝胶的交联程度,膨胀程度及分布范围。
用途
Sephadex G-10葡聚糖凝胶 G-10 分离范围<700 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离
PX G-10柱按照中华人民共和国药典规定了采用色谱法测定头孢他啶、头孢哌酮、头孢噻肟和头孢曲松四种药物中高分子杂质的含量。我公司(天津谱祥科技)改进了此色谱柱的填法从简易干填法到现润湿填法柱效从几百提高到1600(葡聚糖。适合检测:[1]头孢唑肟钠、美洛西林钠、盐酸头孢吡肟、青霉素、阿莫西林、头孢曲松钠、头孢拉定、头孢他啶钠、哌拉西林钠他唑巴坦钠、头孢尼西钠、磺苄西林钠、头孢地尼、头孢美唑等抗生素聚合物分析2000)
Sephadex G-15葡聚糖凝胶 G-15 分离范围<1500 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离
Sephadex G-25葡聚糖凝胶 G-25 分离范围 1000-5000 适用于脱盐、肽与其它小分子的分离
SephadexG-50葡聚糖凝胶 G-50 分离范围 1500-30000 适用于多肽分离、脱盐、清洗生物提取液、分子量测定
Sephadex G-75葡聚糖凝胶 G-75 分离范围 3000-80000 适用于蛋白分离纯化、分子量测定、平衡常数测定
Sephadex G-100葡聚糖凝胶 G-100 分离范围 4000-150000 适用于蛋白分离纯化、分子量测定、平衡常数测定
Sephadex G-150葡聚糖凝胶 G-150 分离范围 5000-300000 适用于蛋白分离纯化、分子量测定、平衡常数测定
Sephadex G-200葡聚糖凝胶 G-200 分离范围 5000-600000 适用于蛋白分离纯化、分子量测定、平衡常数测定
使用方法
1. 乙醇浸泡:
在室温下,将干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小时,并不断搅拌以保证凝胶溶胀,用无盐水洗去残存的乙醇滤干;
2.无盐水浸泡:
室温下,在无盐水中充分溶胀24小时,间隙搅拌,以保证凝胶的完全溶胀,然后;
3. 盐酸浸泡:
在常温下再用0.2N HCl浸泡12小时,间隙搅拌,滤干,水洗至中性;
4. 将溶胀好的凝胶脱气后(真空抽滤或超声波)根据装柱要求一次性置入柱内,注意保持湿态装柱,并避免柱内产生气泡或断层;
5. 上样前平衡层析柱至少3-5 个柱体积直到记录仪基线变得平稳为止(流出液的PH值等于上柱的Buffer 的PH值);
6. 凝胶过滤的上样量一般为5%的柱床体积,我们建议初次上样控制在1-2%的床体积,视分离情况可以调整;脱盐时上样量可以达到20% 的柱床体积,柱高的选择也与分离要求相关,柱高控制在40-50cm 以下,过高的凝胶层会引起较大的反压,应当尽可能避免。难分离物质要有一定柱高和流速控制,脱盐时高径比为5:1 即可;
7. 洗脱方法:
可以用无盐水,也可以采用上柱时的缓冲液洗脱;在上柱Buffer 中加入NaCl等梯度洗脱或盐梯度洗脱也可以完全分离纯化;
8. 在位清洗(CIP)
凝胶使用十次后作一次CIP,目的是去除柱床内沉淀的及顽固残留的蛋白。方法是以40cm/h 用1M 氢氧化钠反向洗四个柱体积,再以至少三个柱体积平衡缓冲液再生。
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