将培养物放入罐中。如果使用培养皿,用窄条滤纸夹在培养皿的底和盖之间以防止冷凝水将其堵住。

除培养物之外，还应加人氧化还原指示剂。指示剂由巯基乙酸培养基组成。或者在带塞的试管屮加入含有业甲基蓝的碱性葡萄糖溶液，此溶液由等量的 0.006mol/LNaOH溶液，0.015%的亚甲基蓝水溶液和的葡萄糖溶液配制而成。要求 将溶液煮沸至无色后立即放入厌氧罐中。

将盖子固定好。如果盖子和罐之间没有配置橡胶或硅橡胶垫圈，则应预先在罐的边缘涂抹高度真空的硅润滑脂。

将带有真空计的抽滤泵连到厌氧罐盖子上的一个旋塞上。用带有压力计并具有良好调节功能的减压阀将氢气供给装置与罐连接起来，使氢气以14kPa或更低的压力进入。 在减压阀和厌氧罐之间连接一个缓冲瓶，则可以观察氢气流的情况。另一种加人氢气的方法是用启普发生器。

苜先，打开袖滤泵直至罐内压力达到6.71左右，关闭旋塞。调节氢气流量，观察缓冲瓶直至大约每秒有一个气泡冒出。再将氢气装置连接到厌氧罐的第二个旋塞上，打开旋塞，使氢气慢慢进入罐中，罐内压力达到大气压后，再让氢气缓缓注入罐中约5关 闭旋塞，取走氢气供给装置和抽真空装置,将厌氧罐放入所需的温度下进行培养。指示剂 在几小时后脱色。培养完毕打开罐子前指示剂应保持无色状态。指示剂不脱色可能是由于罐的支路漏气或者盖子垫圏、接头密封不严所致，也可能是由于催化剂中毒造成。

培养完毕后,罐中常会出现轻微的负压，因此，应先打幵旋塞使罐中达到大气压后再关闭