森贝伽免费提供氰化高铁血红蛋白测定法及红细胞计数的应用技术
本实验的主要目的是掌握氰化高铁血红蛋白测定法原理、方法与操作步骤；掌握血细胞计数板的使用和结构；了解红细胞计数的原理、方法与步骤。具体实验方法如下：
实验目的要求：
通过血红蛋白测定、红细胞计数实验要求：
1、掌握红细胞计数、血红蛋白测定的原理、方法及注意事项。
2、掌握血细胞计数板的结构
一、血红蛋白测定（Hemoglobin简称Hb）
（氰化高铁血红蛋白法）
【原理】
血红蛋白中的亚铁离子（Fe2+）被高铁氧化成高离子（Fe3+），血红蛋白转化成高铁血红蛋白，高铁血红蛋白与氰离子（CN-）结合，生成稳定的氰化高铁血红蛋白。用光电比色计在540nm波长比色。从HicN参考液制作的标准曲线上读取血红蛋白克数。
【操作】
取试剂5毫升加入血液20ul混匀置5分钟后用721光电比色仪，540nm波长，试剂为空白调0点比色，读取光密度，查标准曲线得结果。
二、红细胞计数（red blood cell简称RBC）——显微镜直接计数（试管法）
【原理】
一定量的血液经一定量等渗性稀释液稀释后，充入血细胞计数池中显微镜下计数一定容积内的细胞，再换算成每升标本的细胞数报告。
【操作方法】
l、取红细胞稀释液2.0ml毫升，放入一小试管内。
2、用血红蛋白吸管吸血至l0ul处。
3、擦去管尖外部余血将血液迅速轻轻吹入盛有红细胞稀释液的试管内，吸上清液嗽洗吸管2-3次，立即摇匀。
4、用玻棒取混悬液少量，充入计数池内。
5、待2—3分钟，让红细胞完全下沉后，将计数板平放在显微镜台上，用低倍镜观察，如红细胞分布均匀即可换高倍镜进行计数。
红细胞计数的区域:
中心大方格中的5个中方格（正中一个和四角各一个）。
【注意事项】
1、吸管、试管要注意清洁、干燥以防溶血，操作迅速避免血液凝固，如有血凝块应重新采血。
同时做血红蛋白测定，白细胞计数和分类计数，在采血时应先做血膜再做红细胞，然后做白细胞，血红蛋白检验，避免红细胞破坏。
2、充液：
充液前，红细胞复液要充分摇匀，红细胞悬液注入计数池内要求分布均匀，不可有气泡，亦不可有多余液体外溢。
3、质量控制：
中方格内红细胞分布应均匀，健康成人每中方格红细胞数约为80—100个，各中方格内之红细胞相近，如悬殊过大（超过10个细胞以上的）应重混匀再充填。
报告方式：
Hb ： g/L
RBC: ×l012/L
小结：在测定血红蛋白吸光值前，需要校准分光光度计，HicN参考液中KCN是剧毒物品，配制的时候一定要严格按照程序操作，避免溶液对自身的伤害。