β-胡萝卜素（β-C）ELISA试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

1 使用目的：

本试剂盒用于饲料、鱼、虾和肉类组织（如鸡、牛肉和猪肉），鸡蛋、蜂蜜、牛奶、血清和尿样中β-胡萝卜素（β-C）残留的定量检测。

2 实验原理：

本试剂盒采用竞争ELISA方法，在微孔板包被有β-胡萝卜素（β-C）偶联抗原，加入β-胡萝卜素（β-C）标准品或样品，游离β-胡萝卜素（β-C）与微孔条上预包被的β-胡萝卜素（β-C）偶联抗原互相竞争抗β-胡萝卜素（β-C）抗体酶标记物，用TMB底物显色，加入终止液后颜色由蓝色变为黄色，用酶标仪在450nm波长下进行检测，吸光值与样品中β-胡萝卜素（β-C）含量成反比，通过标准曲线计算样品中β-胡萝卜素（β-C）的含量。

3 试剂盒组成：

3.1 预包被的β-胡萝卜素（β-C）偶联抗原的可拆酶标板：1块（12孔×8条）。
3.2β-胡萝卜素（β-C）标准品：6瓶（1ml/瓶），含量分别是：0 umol/L, 3 umol/L,9 umol/L,27 umol/L,81 umol/L,243 umol/L

3.3抗β-胡萝卜素（β-C）抗体酶结合物：1瓶（6ml）。
3.4显色液A：1瓶（6ml）。
3.5显色液B：1瓶（6ml）。
3.6终止液：1瓶（6ml），2M硫酸。
3.7样本稀释液：1瓶（10×, 6ml），用于样品稀释用。
3.8浓缩洗涤液：1瓶（20×，20ml），用于洗板。
3.9说明书一份。

4 需要而未提供的材料：
4.1 设备
4.1.1波长450nm酶标仪。
4.1.2粉碎机。
4.1.3量筒。
4.1.4振荡器。
4.1.5漏斗。
4.1.6Whatman No 1或相当的滤纸。
4.1.7微量移液器。
4.2 试剂
4.2.1去离子水或蒸馏水。
4.2.2 甲醇。
5 贮存：
5.1 试剂盒贮存于2~8℃，切勿冷冻
5.2 未用完的微孔板应该密封干燥保存
6 注意事项：
6.1 使用试剂盒前请仔细阅读说明书。
6.2 不要使用过期试剂盒。
6.3 试剂盒使用前，将试剂恢复至室温（25±2℃），建议至少回温2小时。
6.4 标准品中含有β-胡萝卜素（β-C），使用时应特别注意，操作时应带手套。
6.5 终止液中含有硫酸，使用时防止灼伤皮肤及腐蚀衣物。
6.6 不同标准品、样品所用吸头不能混用，否则会影响试验结果。
6.7 不同批号试剂盒中的试剂不得混用；不同标准品、样品所用吸头不得混用，否则会影响实验结果。
6.8 稀释样本时必须用本试剂盒中的样本稀释液，否则会影响实验结果
6.9 混合试剂时应避免起泡。

7 工作液准备：
7.1β-胡萝卜素（β-C）标准品溶液：0 umol/L, 3 umol/L,9 umol/L,27 umol/L,81 umol/L,243 umol/L

7.2 浓缩洗涤液：用蒸馏水按1:20（1+19）稀释备用

7.3 样本稀释液：备用
7.3 显色剂：已备用，避免光线直照
7.4 反应终止液：已备用
8 样品处理程序：（样品在提取过程中，要严格按说明书操作，提取过程中应准确稀释，否则会出现结果不准确，样品应当保存在阴凉避光之处及冷藏保存）
8.1取10g粉碎的样品，加 20ml 70%甲醇溶液
8.2强力振荡3分钟
8.3用Whatman No 1滤纸过滤
8.4取100µl处理后的样品，加入400µl样本稀释液
8.5取50μl稀释液进行分析（稀释倍数10）

11 特异性：
物质 交叉反应
β-胡萝卜素（β-C）100%

12 试剂盒参数：
本试剂盒检测下限为3ppb
B0吸光度最佳值应大于1.0
试剂盒吸光度板内误差小于8％，板间误差小于15％。
用本说明书提供的组织样本提取方法回收率大于80％。
13 标准曲线模式（仅供参考）：
试剂盒提供的标准曲线范围为3umol/L~243umol/L。

14 分析限制：
本试剂盒检测为阳性的样品应该用另一种方法如HPLC或GC/MS加以确证。