1. 选择适当的细胞接种浓度，保证细胞培养结束时浓度不至于过满。

2. 种板技术：均匀。

3. 实验时应设置调零孔，溶媒孔，加药孔。

调零孔：培养基、MTT、DMSO。（无细胞）

溶媒孔：培养液、MTT、DMSO、细胞、溶酶。

加药孔：培养液、MTT、DMSO、细胞、不同浓度的药物。

（一般5-7个梯度，设3-5个复孔）

4. 避免血清干扰：一般选小于10%胎牛血清的培养液进行。

5. 边缘效应：周边孔加入PBS。

6. MTT的配置： MTT 0.5克，溶于100 ml的磷酸缓冲液。4℃下避光保存2周。

7. 孔板的重复利用（1.做完MTT后用大水流尽量将板冲净，然后用洗衣粉水泡几个小时（小心最好让洗衣粉先化开）。2.用自来水冲净洗衣粉水，倒扣晾干.3.重铬酸钾加浓硫酸配成的酸液中浸泡过夜泡洗液（六小时以上即可）后自来水洗净（20次左右）每个孔都要处理4.用去离子水冲洗3遍，双蒸水冲洗3遍，烤干5.超净台中紫外线照射2个小时左右，就可以用了，不可以高压。或泡酸过夜，dd水冲洗干净，烘干或者晾干后紫外照射30min以上即可使用。

8. MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力，但不能测定细胞绝对数。

9. 在用酶标仪检测结果的时候，为了保证实验结果的线性，MTT 吸光度最好在0-0.7 范围内。

10. MTT有致癌性，用的时候小心,有条件最好带那种透明的簿膜手套。

11. 配成的MTT需要无菌，MTT对菌很敏感；往96孔板加时不避光也没有关系，毕竟时间较短，或者你不放心的时候可以操作台上的照明灯关掉。