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免疫印迹技术概述

提供者：上海金穗生物科技有限公司发布时间：2012/9/25 9:22:02 阅读次数：1054次进入该公司店铺

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免疫印迹从早期用抗体直接“着染”聚丙烯酰胺凝胶内的蛋白（Burridge 1976；Showe等1976）发展为使用多样化复制技术的方法。例如，将分离的多肽转移至硝酸纤维素膜，化学活化的滤纸条或尼龙膜上（Gershoni和Paladel983；Towbin和Gordon1984；Beisiegell986）。在上述基础上经过多次改进，最常用和最简便的方法是使用电转移将分离的蛋白印迹在硝酸纤维素膜上（Towbin等1979；Burnettel981）。

免疫印迹程序可分为5个步骤：

1．抗原样品的制备；

几乎任何蛋白质都可用于免疫印迹。将蛋白质与标准的样品缓冲液混合，经凝胶电泳分离后再用于免疫印迹。常用的样品有纯化或部分纯化的制备液，细胞粗提液或免疫沉淀样品。

免疫印迹的优势是可分析不能用其他免疫化学技术进行研究的蛋白质样品。例如，不能标记的蛋白质或不溶于温和抽提缓冲液的蛋白质等。免疫印迹还可分析组织、器官或整个微生物等来源的粗制样品。

最常用的样品来源有3个途径：蛋白质溶液、细胞裂解液和免疫沉淀蛋白，将在下面分别介绍。但是任何来源的蛋白质经适当处理后都可用于免疫印迹。

2．凝胶电泳分离样品；

3．分离的多肽转移至膜载体上；

4．印迹膜总蛋白的染色（根据需要）

5．抗原的检测。

蛋白质溶液，通常是细胞或组织的抽提液，用凝胶电泳的样品缓冲液来配制，蛋白质经凝胶电泳分离后转移至可非特异性结合各种蛋白的膜上。将膜直接与凝胶接触，然后置于电场中使蛋白质从凝胶印迹转移至膜上。在某些情况下，可将印迹膜染色检测印迹蛋白的位置，膜上未结合的位点要进行封闭以去除剩余的反应位点。最后是确定特异性抗原的位置，通常是先使用未标记的一抗，然后使用标记的二抗。

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