人大细胞肺癌细胞；NCI-H661到货处理

观察：

1、收到细胞后，请及时核对培养瓶上标注的细胞名称是否与订购的细胞名称一致以及培养瓶是否有破损或漏液等异常情况。

处理：

1、75%酒精棉球擦拭 T25 细胞培养瓶外部。

2、显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照保存（40x,100x,200x 各一张）三天照片为重要售后依据，不提供照片默认收到状态良好。

3、不要打开培养瓶盖，将细胞放入 37 度培养箱中静置 3-4 小时后再做处理，以稳定细胞状态。

4、收到细胞后，及时查看说明书是贴壁细胞还是悬浮细胞形态，并按常规贴壁或悬浮细胞的传代方法操作。 贴壁：未超过 80%汇合度时，将瓶装的培养液收集至离心管中，留5ml 培养基，放入 37℃、5%CO2 孵箱培养；超过 80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。初次传代，建议 1:2 传代（传代时建议一瓶用原瓶里面的培养基，另外一瓶用自己配的培养基，进行对比培养。）

疏松贴壁：个别特殊细胞贴壁不牢，在邮寄过程中发生细胞脱落，请将培养瓶所有培养液收集至离心管，1000rpm 离心 5min，收集上清（后期对比培养使用），沉淀加胰酶1-2ml，轻轻吹打，重悬，消化 1-2 分钟后，加 5ml 培养基终止反应。再离心，弃上清，加1-2ml

培养基重悬。然后按 1:2 比例进行分瓶传代，补充新的培养基至5-8ml/瓶，然后放入 37℃,5%CO2 细胞培养箱中培养。

1、收到细胞后，检查外包装情况和箱内是否还有干冰。如有外包装破损干冰已挥发等问题，请即时联系。

2、正常请进行以下操作：将细胞取出转移至液氮或－80 度冰箱保存，建议尽早复苏。3、复苏然后管如有活性状态问题及时与我们联系，会有技术人员与您沟通指导后再复苏第二管。特别说明：未与我方联系擅自复苏第二管出现问题不予售后。细胞复苏

1、 从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用 75%的酒精擦拭冻存管外壁；

2、将冻存管中的细胞移至含 5ml 培养基的 15ml 离心管中，1000rpm 离心5min；3、弃上清，沉淀用 5ml 培养基重悬，接种 T25 培养瓶，于 37℃,5%CO2 细胞培养箱中培养；

4、第二天，换用新鲜培养基继续培养。 细胞传代

1、细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 T25 培养瓶中的培养液，用PBS 清洗细胞一次：2、添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入 5ml 培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml 离心管中，1000rpm 离心 5min；

3、弃上清，沉淀细胞用 1-2ml 培养基重悬，然后按 1:2 比例进行分瓶传代，补充新的培养基至 5-8ml/瓶，然后放入 37℃,5%CO2 细胞培养箱中培养；细胞冻存

1、细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 T25 培养瓶中的培养液，用PBS 清洗细胞一次；2、添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入 5ml 培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml 离心管中，1000rpm 离心 5min；

3、 弃上清，沉淀细胞加入 1ml/支的富衡无血清冻存液（FH7001），混匀后加入冻存管中。（如：冻一支，加入 1ml 无血清冻存液）

4、 将冻存细胞直接放入－80℃冰箱即可；如后期要将细胞转入液氮罐中，需在-80℃冰箱存放 24 小时以上。