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中文名称:人细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4/CD152)ELISA检测试剂盒英文名称:Human cytotoxic T lymphocyte associated antigen 4,CTLA-4 elisa试剂盒
标本:血清、血浆、细胞上清液、尿液、体液、灌洗液、脑脊髓、心房水、胸房水、组织等。
种属:人、大鼠、小鼠、兔子、猪、犬、猴、马、牛、羊、鸡、鸭、鱼等。
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主要成分:酶标板,试剂,标准品等
性状:盒装液体
ELISA试剂盒实验标本:血清、血浆、细胞上清液、尿液、体液、灌洗液、脑脊髓、心房水、胸房水、组织等。
ELISA试剂盒种属齐全:人、大鼠、小鼠、兔子、猪、犬、猴、马、牛、羊、鸡、鸭、鱼等。
产品运输方面:部分现货供应,一般为快递运输,江浙沪隔天到,外地及偏远地方三至五天时间到货
2、检测原理:采用双抗体夹心ABC-ELISA法。
3、服务承诺:工作时间内免费技术咨询和指导,提供来样检测及免费代测服务,保证实验结果的有效性。
4、研究领域:炎症研究、神经生物学、肿瘤研究、新陈代谢、信号通路、免疫学、传染病、其他研究。
如果人细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4/CD152)ELISA试剂盒 所检测的样本不是连续的,所以实验中不用的板条立即放回包装中,密闭封口,4℃可保存1个 月。其余不用试剂应包装好或盖好。在做样本检测前要有一个完整的计划,如标本编号、所测项目、目的等。操作时尽量使用一次性的吸头,避免交叉污染。
主要分为以下系列:
1、细胞因子检测试剂盒
2、内分泌检测试剂盒
3、肝纤维化检测试剂盒
4、心肌梗塞检测试剂盒
5、肿瘤标志物检测试剂盒
6、自身免疫检测试剂盒
7、优生优育检测试剂盒
8、传染病检测试剂盒等等。
人细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4/CD152)ELISA试剂盒 操作步骤
方法一 用于检测未知抗原的双抗体夹心法:
1. 包被:用0.05M PH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。(简称洗涤,下同)。
2. 加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。
3. 加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小时,洗涤。
4. 加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分钟。
5. 终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测O·D值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔O·D值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。
方法二 用于检测未知抗体的间接法:
用包被缓冲液将已知抗原稀释至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃过夜。次日洗涤3次。加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中,加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml,37℃孵育30-60分钟,洗涤,最后一遍用DDW洗涤。其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。
人细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4/CD152)ELISA试剂盒 注意事项
1. 正式试验时,应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件,待检样品应作一式二份,以保证实验结果的准确性。有时本底较高,说明有非特异性反应,可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。
2. 在人细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4/CD152)ELISA试剂盒 实验中,选择好各项ELISA实验条件是很重要的,其中包括:
(1) 固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃18~24小时。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD值最大而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。
(3) 酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
(4) 酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入。
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