ProFlex™ PCR是一款独一无二的热循环仪,可由三名用户同时远程控制三个独立的模块,有助于使您实验室的PCR实验实现可视化、可控化和正规化。
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人可溶性血管内皮细胞蛋白C受体(sEPCR)elisa试剂盒参数:
编号 | 中文名称 | 英文名称 | 规格 |
F2637-A | 人可溶性血管内皮细胞蛋白C受体(sEPCR)elisa试剂盒 | Human soluble endothelial protein C receptor,sEPCR elisa Kit | 48T |
人可溶性血管内皮细胞蛋白C受体(sEPCR)elisa试剂盒技术流程ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,间接地放大了免疫反应的结果,使测定方法达到很高的敏感度。 ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。然而,影响Elisa试验结果的因素很多,故加强各个环节的质量保证才能充分发挥其方法学的优点。
主要优点1、简易操作、高效、灵敏、特异的抗体;2、稳定的重复性和可靠性;3、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相载体;4、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型;5、节省实验经费。
使用方法1、 血清:操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。2、 血浆:EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。3、 细胞上清液:1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。4、 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液。5、 保存:如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。操作步骤1:双抗体夹心法1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃ 过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。(简称洗涤,下同)。2. 加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。3. 加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小时,洗涤。4. 加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。5. 终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。6. 结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。操作步骤2:间接法1.用包被缓冲液将已知抗原稀释至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃过夜;2.次日洗涤3次;3.加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤;4.(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中,加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml;5.37℃孵育30-60分钟,洗涤;6.’最后一遍用DDW洗涤。其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。
标本要求1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3 的样品,因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
应用信息ELISA法是免疫诊断中的一项新技术,现已成功地应用于多种病原微生物所引起的传染病、寄生虫病及非传染病等方面的免疫诊断。也已应用于大分子抗原和小分子抗原的定量测定,根据已经使用的结果,认为ELISA法具有灵敏、特异、简单、快速、稳定及易于自动化操作等特点。不仅适用于临床标本的检查,而且由于一天之内可以检查几百甚至上千份标本,因此,也适合于血清流行病学调查。本法不仅可以用来测定抗体,而且也可用于测定体液中的循环抗原,所以也是一种早期诊断的良好方法。因此ELISA法在生物医学各领域的应用范围日益扩大,可概括四个方面:1、免疫酶染色各种细胞内成份的定位。2、研究抗酶抗体的合成。3、显现微量的免疫沉淀反应。4、定量检测体液中抗原或抗体成份。编辑本段进口分装进口分装:检测范围和灵敏度不同,用量少时,可使用分装,前期是它的长久性不是很好。试剂盒的标准曲线最高点OD 值均在2.0±0.2,零孔的OD 值都控制在0.10以下。试剂盒的标准曲线相关系数R≥0.99。试剂盒重复性好,板内、板间变异系数均小于9 %。试剂的组份都多给20%的富余量,确保完成48/96孔的检测,避免分次检测可能造成试剂量不足的情况。检测抗体及酶结合物的稀释度合适(均为1:30), 方便试验操作者准确地做稀释工作,保证实验结果的重复性。白介素6是一种细胞因子,已被证实为B细胞分化因子.它是一种抗体形成系统,它的生理特性,如肝细胞急性蛋白合成的诱导和基于和白介素3协同作用的生长刺激等,也备受关注. 并且已证实白介素-6与病理学存在稳定的相关关系.例如,报道多种疾病的生长因子为白介素-6, 骨髓瘤细胞能合成白介素-6并表达白介素-6受体.此外, 白介素6在多种炎性疾病和自身免疫疾病发挥重要的作用. 此试剂盒能高灵敏度的检测小鼠血清和细胞基质上清的白介素6 原理 此试剂盒运用了两种特异性抗体,洗板后加入TMB底物液显色,显色的强度与小鼠的白介素-6的量成正比. 检测范围 10.94 700 pg/mL [2]预期用途此IBL试剂盒能用于小鼠血清,EDTA血浆,细胞上清中白介素-6的定量检测试剂盒成分1 预包被板: 抗小鼠白介素-6兔子IgG,亲合纯化 96T2 酶标记抗体: (30倍浓缩)HRP标记抗小鼠白介素-6兔子IgG,亲合纯化 0.4mL x 13 标准品: 重组小鼠白介素-6 0.5mL x 2 4 EIA缓冲液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 30mL x 15 标记抗体稀释液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 12mL x 16 显色剂: TMB底物液 15mL x 17 终止液: 1N硫酸 12mL x 18 浓缩洗涤液: (40倍浓缩) 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 50mL x 1 操作说明 1实验所需器材(但试剂盒没有提供) 酶标仪(450nm) 微移液管及其吸嘴 量筒及烧杯 去离子水 冰箱(4°C) 坐标纸(log/log) 吸水纸 试管(用于标准品稀释) 温育箱(37°C ± 1°C) 洗瓶 (用于洗板) 一次性试剂管(用于浓缩酶标记抗体和显色剂)[3]
注意事项1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。4. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD 值大于标准品孔第一孔的OD 值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6.底物请避光保存。7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9.本试剂不同批号组分不得混用。10.保存条件及有效期:1.试剂盒保存:;2-8℃。2.有效期:6 个月
实时荧光定量PCR简介 荧光定量PCR全攻略 引物合成订单下载 | |||
基本原理 | 广泛应用 | 技术服务 | 引物设计软件下载 |
荧光定量PCR检测技术从诞生到现在已经有 8 年了,但是其应用在近四年才迅猛增长。在Medline 数据庫中,用“ Taqman” 或 ”real time PCR”作为关键词检索,在1996年仅有19篇,在1997年仅有28篇,在98 、 99 、2000 年分别达到了52 、157 、409篇, 2003年已经达到2984篇,相信在不久的将来会有更多的文章发表。针对实时 PCR 这一热点领域,闪晶公司对它进行了深入细致的研究,并且及时地为广大科研人员推出这项技术服务。
荧光定量PCR基本原理 • Taqman 技术:该技术以美国 ABI 公司为代表。 PCR 扩增时,在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针。该探针为一直线型的寡核苷酸,两端分别标记一个荧光报告基团和一个荧光淬灭基团,探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收, PCR 仪检测不到荧光信号; PCR 扩增时(在延伸阶段), Taq 酶的 5' - 3' 外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条 DNA 链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与 PCR 产物形成完全同步,这也是定量的基础所在。
相关链接......ABI公司Taqman探针MGB探针Sybr green I染料ROX染料Taq酶(荧光定量PCR专用)热启动酶热启动荧光PCR定量核心试剂盒荧光定量PCR一步法RT-PCR试剂盒TrizolRNA提取试剂UNG酶标准品克隆定点突变亚克隆dUTP
• Beacon 技术:该技术以美国人 Tagyi 为代表。也是加入了荧光探针,但它是 环状的寡核苷酸探针,分别由茎部和环部组成, 两端分别标记 荧光报告基团和荧光猝灭基团,在无靶序列的情况下,探针始终是环状,报告基团的荧光被猝灭基团猝灭,使荧光检测仪检测不到荧光信号;而在有靶序列时,即在 PCR 的退火阶段探针与靶序列结合,使荧光报告基团和猝灭基团分开,这样荧光仪可以检测到荧光,荧光信号的强弱代表了靶序列的多少。
相关链接......分子信标知识介绍
• FRET 技术:该技术以 Roche( 罗氏公司 ) 为代表。它的基本原理是:两条直线型寡核苷酸探针,其中一条的 3 ‘端标记荧光激发基团,另一条的 5 ' 端标记荧光检测基团,在无靶序列的情况下,两条探针分开,无法进行能量的传递,这样荧光仪不能检测到荧光信号;而当有靶序列时,即在 PCR 的退火阶段两条探针与靶序列结合,使得两条探针上的荧光基团可以进行能量的传递,这样荧光仪就可以检测到荧光信号,荧光信号的强弱代表了靶序列的多少。
实时荧光定量PCR中的几个俗语 • Ct 值:是指每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数。(如图所示)
• 荧光域值( threshold ):是指 PCR 反应的前 15 个循环的荧光信号,荧光域值的缺省设置是 3-15 个循环的荧光信号的标准偏差的 10 倍,即: threshold.• Ct 值与起始模板的关系:研究表明,每个模板的 Ct 值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系〔 1 〕,起始拷贝数越多, Ct 值越小。利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线,其中横坐标代表起始拷贝数的对数,纵坐标代 Ct 值(如图 2 所示)。因此,只要获得未知样品的 Ct 值,即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数。
荧光定量PCR应用广泛 • 可以对各种基因的表达进行定量分析,如:同一基因在不同组织中的表达差异、同一基因在不同药物处理后的表达差异、转基因食品的检测。过去最常用的高通量筛选基因表达差异的技术是 cDNA 芯片和差异显示,但这两种技术的缺点是只能定性而非完整意义上的定量分析。实时 PCR 技术和高通道实时 PCR 仪的出现,无疑为这种检测提供了极大的方便。 • 可以进行点突变分析和等位基因分析,用不同的荧光报告基团标记 Taqman 探针,然后分别与野生型和突变型杂交,如果一种荧光信号明显强于另一种荧光信号,则表明它是纯合子;如果两种荧光信号都明显增强,则表明它是杂合子。另外分子信标( Molecular Beacon)就是专门为这种技术设计的探针。 • 可以进行单核苷酸多态性的分析,检测单核苷酸多态性对于研究个体对不同疾病的易感性或者个体对特定药物的不同反应有着重要的意义,因分子信标结构的巧妙性,一旦 SNP 的序列信息是已知的,采用这种技术进行高通量的 SNP 检测将会变得简单而准确。 • 可以进行 DNA 甲基化检测, DNA 甲基化同人类的许多疾病有关,特别是癌症, Laird 报道了一种称作 Methylight 的技术,在扩增之前先处理 DNA ,使得未甲基化的胞嘧啶变成尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不受影响,用特异性的引物和 Taqman 探针来区分甲基化和非甲基化的 DNA ,这种方法不仅方便而且灵敏度更高。 • 对传染性疾病进行定量定性分析,这在我国应用比较广泛,大家比较熟悉。许多生产临床PCR 试剂的厂商已经陆续推出了一系列的诊断试剂,如:肝炎系列、性病系列、肿瘤系列等等。
• 闪晶生物同时提供药物伴随诊断(companion diagnostic)方法如EGFR、BRAF V600E突变、HER2 扩增、BCR-Abl、PML-RAR、ALK融合基因等。
荧光定量PCR技术服务 (含lncRNA荧光定量PCR-环状RNA荧光定量PCR)荧光定量PCR用Taqman方法对DNA/RNA进行real time PCR的定量测定或型的鉴定。
荧光定量PCR服务要求1. 请您提供新鲜的且尽量多的材料(各种材料的RNA提取量请参照“总RNA 的提取”),或直接提供纯化好的总RNA(大于 5 ug/ 样品);(各种材料的DNA提取量请参照“ DNA的提取”),或直接提供纯化好的DNA(大于 5 ug/ 样品)。 2. 请通过E-mail提供已知的全长基因序列。3. 请提供尽可能详细的背景资料:DNA/ RNA来源、丰度等
荧光定量PCR操作程序 1. 根据基因序列设计特异性的引物和荧光探针。 2. 提取DNA/RNA 。 3. Real Time PCR(荧光定量PCR),进行实验结果分析 4. 实验完成后,提供完整的实验报告(含软件分析结果)及引物等实验材料
荧光定量PCR收费标准 1、RNA提取:10-20个样品的RNA提取是:150元/个;20-30个样品的RNA提取是:120 元/个;30个以上样品的RNA提取是:100元/个;每份材料最少应提供:100mg/样品2、一个指标每个样品为150元;二个指标每个样品为240元;三指标每个样品为300元,三个指标以上每个样品为80元/反应。3、引物合成为每个碱基2.1元,探针标记为1200元/条,如果是用sybr green I(染料)做,则免去探针的费用,染料赠送。4、内参的GAPDH引物探针免费,标准曲线免费赠送。5、不再收取任何的基础费或者开机费。
人(sEPCR)kit,可溶性血管内皮细胞蛋白C受体Elisa试剂盒本试剂仅供研究使用 Elisa kit规格:48孔配置/96孔配置标准品稀释液:1.5ml×1瓶酶标试剂:3 ml×1瓶(48)/6 ml×1瓶(96)
特异性:本试剂盒可同时检测天然或重组的,且与其他相关蛋白无交叉反应。有效期:6个月预期应用:ELISA法定量测定血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中的含量。
人(sEPCR)kit,可溶性血管内皮细胞蛋白C受体Elisa试剂盒样本处理及要求:1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.7. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
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Mycoplasma, the smallest and self-replicating prokaryotes, are common contaminant of primary and continuous cell line cultures. It has been shown that micoplasma contamination affects cell growth, morphology and metabolism. Because of their small size and flexibility, mycoplasma can pass through commonly used filters of 0.2 μm. Furthermore, unlike bacterial and fungi, micoplasma contamination is resistant to commonly used antibiotics, and not easy to be spotted visually. These drawbacks emphasize the need for regular screening in control of mycoplasma contamination. Conventional screening methods include microbiological culture, fluorescent DNA staining and biochemical detection methods. However, mycoplasma culture is restricted to specialized laboratories and takes 2-4 weeks. Results of DNA fluorochrome staining are difficult to interpret due to the presence of broken nuclei. Various biochemical detections are time consuming and often lack of sensitivity. Recently, polymerase chain reaction (PCR) based methods have been developed as a quick and convenient detection of low level mycoplasma infection, which offers great advantage over the conventional methods because of its extreme sensitivity and specificity. Computer alignment studies of mycoplasmal 16S rRNA sequences have revealed the existence of highly conserved sequences. Primers designed according to these sequences allow the specific amplification of mycoplasma DNA fragment and thus highly sensitive detection of mycoplasma. ScienCell™ Mycoplasma PCR Detection Kit is a 16S rRNA-based PCR assay including 2X reaction buffer, primer set, as well as internal amplification control (IAC) and positive sample control. The genus-specific primer set we select recognizes the five typical contaminating mycoplasma species (i.e. M. hyorhinis, M. arginini, M. orale, M. fermentans, and A. laidlawi), which account for 98% of contaminations, as well as members of the genera Ureaplasma, Spiroplasma, and Acholeplasma, which account for the remaining 2% of contaminations. Eukaryotic and bacterial DNA is not amplified by this kit. The IAC is designed to be co-amplified simultaneously with the target mycoplasma sequence by the same set of primers. The resulted control band, which is distinguished from the target band by a difference in molecular mass, indicates the occurrence of DNA amplification. Therefore, false negative results due to the presence of PCR inhibitors in some cell cultures can be identified. Our kit also provides a positive sample control, which is noninfectious genomic DNA (gDNA) of M. fermentans. On the other hand, a no template (i.e. DNA-free DI H2O) negative sample control can help to determine whether there is a false positive result due to carry-over contamination. Each experiment should include both positive and negative sample controls, as well as the IAC.Product Use
This assay kit is used to detect mycoplasma in vitro. It is for research use only. Not for use in animals, humans, or diagnostic procedures.
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【产品名称】Gene-Explorer国产双槽智能普通型基因扩增仪PCR仪
【产品型号】Gene-Explorer双槽智能:GE9611/4831/6021/3841/4851
【关键词】PCR仪,扩增仪,基因扩增仪,PCR基因扩增仪,PCR仪
【产品介绍】
产品型号 | GE9611/4831/6021/3841/4851 普通型 |
样本容量 Capacity | 96×0.2ml,60×0.5ml,Double48×0.2ml, 48×0.2ml+30×0.5ml,384well,In-situ Plate |
温度范围 Temperature Range | 0~<100℃> |
大升温速率 Heating Rate | <4℃>/s |
大降温速率 Cooling Rate | <3℃>/s |
温度均匀性 Uniformity | ≤±<0.2℃> |
温度性 Accuracy | ≤±<0.1℃> |
温度显示分辨率 Display Resolution | <0.1℃> |
温度控制方式 Temperature Control | Block\\Tube |
变温速率可调 Ramping Rate Adjustable | 0.1~<2.5℃> |
梯度温度均匀性 Gradient Uniformity | / |
梯度性Gradient Accuracy | / |
梯度温度范围 Gradient Temp. Range | / |
梯度设置范围 Gradient Spread | / |
热盖温度范围 Hot Lid Temperature | 30~<110℃> |
热盖高度调节 Hot Lid Height Adjustable | 无级可调 Stepless Adjustable |
程序存储数量 Number of Programs | 1000 +(USB FLASH) |
程序大步骤 Max.No.of Step | 30 |
程序大循环数 Max.No.of Cycle | 100 |
时间递增/递减 Time Increment/Decrement | 1 Sec ~ 9 Min 59 Sec |
温度递增/递减 Temp. Increment/Decrement | 0.1~<9.9℃> |
程序暂停功能 Pause Funcation | 有 Yes |
掉电数据保护 Auto Data Protection | 有 Yes |
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