英文名称:The use of error prone PCR Kit主要成分:酶标板,试剂,标准品等。规格:96T/孔、48T/孔检测范围:欢迎QQ或电话索取原版说明书。保存温度:低温保存,详情可来电。即用型易错PCR试剂盒 ELISA方法被广泛应用于各种抗原和抗体测定。 但ELISA测定中影响因素较多,而且其操作中有一定的技术要求,在检测过程中除正常反应外,有时常见到一些错误的结果。引起ELISA测定错误结果的原因主要有:①标本因素;②试剂因素;③操作因素。ELISA检测试剂盒等公司产品满足于生物化学、分子生物学 、细胞生物学、免疫学等生物实验需求,不用于临床诊断。欢迎来电了解更多详情。中国老牌ELISA试剂盒供应商-江莱生物,期待您的来电。更多详情请登陆www.laibio.com,咨询我司专业技术人员。即用型易错PCR试剂盒 为您精选同类产品:
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即用型易错PCR试剂盒 江莱生物,您身边最好的科研试剂供应商,欢迎来电订购您所需产品。基因扩增仪scientz-MG96+参数:样品台容量:0.2ml×96孔+ 0.5ml×77孔适用管型型:0.2ml,0.5ml PCR管,8联排管,12联排管,96孔微孔板,原位板温度范围:0℃~99.9℃温度范围:0℃~99.9℃升温速度:3℃/秒降温速度:2℃/秒温度均匀性:≤± 0.2℃温度准确度:≤± 0.2℃温控方式:模拟管+样品台变温速度可调:是液晶显示:蓝色大屏幕可储存程序:125个最大循环数:99时间递增/递减:1~60秒温度递增/递减:0.1~10℃断电保护:有4℃长期保温:无限长 运行时间显示:有 热盖温度:105℃压盖高度:可微调外形尺寸(LxWxH):315×240×275mm净重:8.8公斤宽电压工作范围170~270V,50/60Hz
人磷酸化cAMP反应元件结合蛋白1(pCREB1)elisa试剂盒,原装elisa试剂盒产品简介:
中文名称:人磷酸化cAMP反应元件结合蛋白1(pCREB1)elisa试剂盒
包装规格:液体盒装 96T/48T
保存条件:2-8℃(长期不使用时,部分试剂应放在-20℃条件下)。
有效期:6个月
Elisa试剂盒可测种属:大鼠、小鼠、人、兔、猪、犬、猴、马、牛、羊、鸡、鸭、鱼等相关种属。
Elisa试剂盒可测标本:测定血清、血浆、细胞上清液、尿液、体液、灌洗液、脑脊髓、心房水、胸房水、组织和相关液体样本中的含量或者活性等。
Elisa试剂盒适用范围:此试剂盒仅用于科研实验,禁用于临床。
人磷酸化cAMP反应元件结合蛋白1(pCREB1)elisa试剂盒厂家主要优势:
1、采用全进口原料和抗体:高效、灵敏、特异,严格引进国际技术标准进行批量生产。
2、高效、灵敏、特异的抗体;
3、先进的优化方案:重复性高,可靠性。
4、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相载体;
5、ELISA试剂盒检测样本齐全:(Human,Rat,Mouse,Rabbit,Monkey, Pig……)用于测定血清,血浆及相关液体等样本。例如适合检测包括血清、血浆、尿液、胸腹水、灌洗液、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等标本。
6、代测,节省实验经费。
7、技术服务,专业,及时,耐心。
8、现货供应,江浙沪隔天到货,外地3-5天到货。
注意:ELISA试剂盒仅供研究使用,不得用于临床实验或人体实验,否则所产生的一切后果,由实验者承担,本公司概不负责。严格按照说明书操作,不同批号不可交换使用,实验者违反说明书操作,后果由实验者承担。
进口elisa试剂盒厂家操作流程与结果:
ELISA试剂盒实验操作程序:
第一步:准备试剂,样品和标准品;
试验所需器材:
1、标准规格酶标仪
2、高速离心机
3、电热恒温培养箱
4、干净的试管和Eppendof管
5、系列可调节移液器及吸头,一次检测样品较多时,最好用多通道移液器
6、蒸馏水,容量瓶等
温馨提示:本图仅供参考,应以同次试验标准品所绘标准曲线来计算标本含量。
按人磷酸化cAMP反应元件结合蛋白1(pCREB1)elisa试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂。ELISA中用的蒸馏水或去离子水,包括用于洗涤的,应为新鲜的和高质量的。自配的缓冲液应用pH计测量较正。从冰箱中取出的试验用试剂应待温度与室温平衡后使用。试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保存。
第二步:加入准备好的样品和标准品,37℃反应90分钟;
第三步:洗板2次,加入生物素化人ANG抗体工作液,37℃反应60分钟;
第四步:洗板3次,加入ABC工作液,37℃反应30分钟;
第五步:洗板5次,加入TMB显色液,37℃反应;
第六步:加入TMB终止液;
第七步:30分钟之内读OD值;
第八步:计算标本待测因子含量。
ELISA试剂盒实验产生测定错误结果(成功与否)的因素有很多,其主要有标本因素、试剂因素和操作因素,稍有不慎都有可能会造成假阳性或假阴性的结果。所以专业的人员加标本一般都用微量加样器,按规定的量加入板孔中。每次加标本应更换吸嘴,以免发生交叉污染,也可用一次性的定量塑料管加样。
人磷酸化cAMP反应元件结合蛋白1(pCREB1)elisa试剂盒厂家售后服务:
ELISA试剂盒需要有权威的血清考核盘(Panel)进行检测,根据检定报告了解其质量水平(按照质量计划选择灵敏度高的或特异性高的试剂),通过询问试剂包被物的组成,如原料来源(基因工程或合成多肽),片段的组合(按比例混合或化学合成),片段的长短等判断试剂的优劣。根据权威部门发布的试剂评价结果,可以了解市场上试剂的质量优劣。
质量保证:
检测用所有试剂全部都为进口试剂,适合检测包括血清、血浆、尿液、胸腹水、灌洗液、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等标本,灵敏度极高。我们专业的ELISA技术服务,保证对所售任何产品一概负责到底,每一份实验结果都真实可靠!
为保证 ELISA试剂盒检测结果的精确度,我们除进口原装产品之外,国产试剂盒都选自国内品牌产品,拒绝分装。elisa试剂盒全部买二送一,半价试用,无效退款退货。凡购买本司任何一种elisa试剂盒,客户只需将需要检测的动物(人、大小鼠、猪、犬、羊、兔、牛、马铃薯等动植物)种类和检测指标(细胞因子、炎症蛋白、肿瘤标记物等等)及标本数量(48T/96T)通知我们即可。我们在接到标本当日起,一周内将实验报告交到您手中!
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人磷酸化cAMP反应元件结合蛋白1(pCREB1)elisa试剂盒是上海润裕生物科技所生产的ELISA试剂盒主营产品之一,本公司其他产品还有:人ELISA试剂盒,鼠ELISA试剂盒,兔ELISA试剂盒,牛ELISA试剂盒,羊ELISA试剂盒,猫ELISA试剂盒,鸡ELISA试剂盒,猪ELISA试剂盒,马ELISA试剂盒,鸭ELISA试剂盒等等。本公司生产的所有ELISA检测试剂盒具有:品质保证、技术严格,无效果退款退货的承诺,如需ELISA试剂盒说明书,请来电索取。另购买本公司任何一种Elisa试剂盒,都可提供代检测服务,从标本收集、保存、预试验、实验、数据分析等全实验过程提供完整的技术指导!
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恒远生物对所售出的产品提供售前售后服务:
售前联系方式: 021-60521817,
售后联系方式: 021-60517348
恒远生物提供免费代测服务,产品仅供科研使用。
产品名称:人活化蛋白C抵抗素(APCR)
英文名称:Human activated protein C resistance,APCR ELISA KIT
产品规格:96人份/48人份
主要组成成分:试剂盒
产品用途:科研ELISA检测试剂盒.本公司可提供实验代测服务. 检测范围:详见说明书 服务:工作时间内免费的技术咨询和指导,为客户提供来样检测服务,最大限度实验结果的性. 人活化蛋白C抵抗素(APCR)试剂盒组成 1 30倍浓缩洗涤液 20ml×1瓶 7 终止液 6ml×1瓶2 酶标试剂 6ml×1瓶 8 标准品(16ng/L) 0.5ml×1瓶3 酶标包被板 12孔×8条 9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶4 样品稀释液 6ml×1瓶 10 说明书 1份5 显色剂A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2张 6 显色剂B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1个人活化蛋白C抵抗素(APCR)相关试剂盒产品: Storage and validity(英文) 1.Storage: 2-8℃. 2.validity: six months. “ 人活化蛋白C抵抗素(APCR)”保存条件及期(中文) 1.试剂盒保存:2-8℃。 2.期:6个月 运输条件低温运输,用干冰或者冰袋低温运输。
本公司生产的PCR MasterMix中加入了高性能PCR增强剂和稳定剂,适用于常规的PCR反应。由于多种PCR增强剂和稳定剂的发现,稳定高效预配好的PCR混合液不仅简化了操作程序、减少了污染、大大降低劳动强度和取样误差,而且增加了PCR反应的特异性,降低了对PCR条件的要求,使实验结果更加精确。
该产品分为含染料和不含染料两种体系,含染料是指含有电泳指示剂(并不含核酸染料),PCR结束后可以直接电泳,但象EB之类的染料还是必须加的。
质量控制检测:
经检测无外源核酸酶活性,PCR方法检测无宿主DNA残留,能有效扩增人基因组中的单拷贝基因。独创的MasterMix配方使整个反应体系非常稳定,所有产品在-20℃条件下可保存一年以上,4℃放置三个月或室温放置一周,依旧有很好的活性。
D0050 | Taq DNA Polymerase | 1000U/5000U | 80/320 |
D0052 | Taq Plus DNA Polymerase | 500U/2500U | 140/560 |
D0060 | 2×Taq PCR MasterMix(含染料) | 1ml/10ml | 80/580 |
D0061 | 2×Taq PCR MasterMix (不含染料) | 1ml/10ml | 80/580 |
D0062 | 2×Pfu PCR MasterMix (含染料) | 1ml/10ml | 160/1200 |
D0063 | 2×Pfu PCR MasterMix (不含染料) | 1ml/10ml | 160/1200 |
D0064 | 2×Taq Plus PCR MasterMix (含染料) | 1ml/10ml | 120/1000 |
D0065 | 2×Taq Plus PCR MasterMix(不含染料) | 1ml/10ml | 120/1000 |
D0073 | dNTP(10mM) | 1ml | 80 |
D0074 | dNTP(2.5mM) | 1ml | 36 |
D0120 | 5×TBE 缓冲液 | 500ml | 120 |
D0121 | 50×TAE 缓冲液 | 500ml | 160 |
D0125 | GoldView核酸染色剂(EB替代品) | 1ml/100ml | 80/4000 |
D0128 | SYBR Green I(10000×)电泳用 | 100ul | 420 |
D0131 | 40%丙烯酰胺/甲叉溶液(19:1) | 100ml/500ml | 80/280 |
D0132 | 6×DNA loading buffer | 5ml | 42 |
D0133 | SYBR Green I(20×)定量PCR用 | 1ml | 120 |
宏鑫电子仪器有限公司
联系人:曾先生: 139 2926 0731
汤小姐:186 6482 7928
24小时在线号码:181 2292 4681
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产品名称:可编程变频电源
产品品牌:KIKUSUI /菊水
产品型号:PCR500L
菊水PCR500L变频电源 新款荧光显示供应二手日本菊水PCR500L变频电源 新款荧光显示型号PCR500L 500W变频电源(日本菊水新款)
输出电压范围:0到100和2到300
输出功率:50
最大电流:5@100@200伏和软件
输出频率范围:1至999.9赫兹。
输入:85到132伏交流电和170到250伏交流电,47至63赫兹
尺寸:8.5“×16.9”×21.7“(217×430×550(毫米)
重量:30KG
多功能交流稳压电源(菊水)KIKUSUI PCR1000L类别:变频电源FREQUENCY CONVERTER品牌:KIKUSUI ELECTRONICS (菊水)型号:PCR1000L[1000W变频电源(日本菊水新款)]产品规格:W455*D595*H415mm,约49kg原产地:日本◆功能:√。基于高速线性放大器的高品位、高稳定和宽量程的输出√。具备各类计测功能(电压•电流的有效值•峰值、功率、有功功率、高次谐波电流简易测定)√。不仅可以输出AC,而且还可输出DC,甚至是AC+DC混合模式√。丰富的电源异常仿真功能√。柔性扩展性强,可望应用于电源环境测试和各类抗扰度试验、功率放大任意信号发生器的输出波形√。通过组合输出扩展套件还可以轻而易举地构建单相/单相3线或单相/三相切换系统。◆基本功能:高品位精确输出/兼交流、直流的输出/可调电压输出/可调频率输出/可调阻抗输出/峰值设定/适用多种输入/限值设定功能/保护功能/记忆功能/锁定功能/同步功能/自检功能◆扩展功能:产线模拟功能/特定波形输出/自定义波形输出/时序功能/相位差设定/谐波电流分析/阻抗输出设定/电源因素峰值测定/交流直流混合模式/扩展记忆功能/传感功能◆特点:电源异常仿真功能 测量瞬时压降 测量谐波电流 谐波分析 彩色荧光显示 进风散热 兼交流、直流、混合模式输出 自检功能 限值设定功能 保护功能 记忆功能 ◆应用:√。电源环境测试√。谐波电源测试√。产线自动测试√。全球通用电源√。电磁干扰测试
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联系电话:135 6451 5386 QQ: 1161399267 余先生
检测方法: ELISA酶联免疫法
说 明 书:随货发送,也可直接联系在线销售索取
测试种属:人、大小鼠、豚鼠、兔子、牛、羊、猪、鸡、鸭elisa试剂盒等种属
检测目的:用于测定血清,血浆及相关液体等样本。例如适合检测包括血清、血浆、尿液、胸腹水、灌洗液、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等标本。
试剂盒保存及有效期:2-8℃,避光保存:6个月。
产品产地:进口/国产
产品库存:
品牌:自主研发/进口原装
产品价格:价格优惠,欢迎来电洽谈!
试剂盒使用范围:仅供科研检测,不得用于临床.
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ELISA试剂盒定性定量检测一步到位,可同时大批量完成多种属的检测工作,而且一天之内可以检查几百甚至上千份标本,正规专业的我们,一定能帮您,将实验做得更好,更精确。试验过程中,如有任何疑问都可和我们联系,无论是售前、售中、售后我们都将始终如一,将优质服务进行到底。
本试剂盒仅供研究使用。
试剂盒组成
1 | 20倍浓缩洗涤液 | 50ml×1瓶 |
9 | 标准品S1(6 IU/L) | 0.5ml×1瓶 |
2 | 链霉亲和素-HRP | 6ml×1瓶 | 标准品S2(4 IU/L) | 0.5ml×1瓶 | |
3 | 酶标包被板 | 12孔×8条 | 标准品S3(2 IU/L) | 0.5ml×1瓶 | |
4 | 生物素标记的抗-IgG抗体 | 6ml×1瓶 | 标准品S4(1IU/L) | 0.5ml×1瓶 | |
5 | 显色剂A液 | 6ml×1瓶 | 标准品S5(0.5 IU/L) | 0.5ml×1瓶 | |
6 | 显色剂B液 | 6ml×1/瓶 | 10 | 密封袋 | 1个 |
7 | 终止液 | 6ml×1瓶 | 11 | 封板膜 | 3张 |
8 | 样品稀释液 | 6ml×1瓶 | 12 | 说明书 | 1份 |
标本要求
1.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
2.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
操作步骤
1. 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品,其余各步操作相同)、标准品孔、待测样品孔。然后在标准品孔中加入标准品50μl,在样本反应孔中先加入待测样品10μl再加入样品稀释液40μl(样品最终稀释度为5倍),盖上封板膜,轻轻振荡混匀,37℃温育45分钟。
3. 配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用
4. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复4次,拍干。
5. 加生物素标记的抗-IgG抗体:每孔加入生物素标记的抗-IgG抗体50μl。37℃温育30分钟
6. 洗涤:操作同4。
7. 加链霉亲和素-HRP:每孔加入50μl的链酶亲和素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。
8. 洗涤:操作同4。
9. 显色:每孔先加入显色剂A 50μl,再加入显色剂B 50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
计算
以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值待入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
注意事项
1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4. 如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先将样本稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以稀释倍数(×5×n)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.本试剂不同批号组分不得混用。显色剂B请避光保存。
7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。
检测范围:0.312 mU/ml-20 mU/ml
灵敏度:0.078 mU/ml
规格:
96人份/盒
保存条件及有效期
1.试剂盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6个月
关于ELISA试剂盒
ELISA试剂盒在国内有许多种叫法,例如:ELISA检测试剂盒、ELISA Kit、酶联免疫试剂盒、酶联免疫吸附测定试剂盒、酶联免疫分析试剂盒、酶免试剂盒等,比较常见的叫法是ELISA检测试剂盒、酶联免疫吸附测定试剂盒等。
ELISA试剂盒自从60-70年代问世以来,得到全世界科研工作者的认可及推崇,在欧美及中国获得很大的推广,尤其是国内生化领域的长足发展。
Elisa生物试验是一种敏感性高,特异性强,重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存,操作简便,结果判断较客观等因素,已广泛应用在免疫学检验的各领域中。ELISA检测试剂盒适用于体外定性检测人血清或血浆中的抗人类戊型肝炎(HEV)病毒 IgM 抗体ELISA检测。
免疫测定技术的基础在于抗原抗体之间的特异结合反应,所以任何优质的诊断试剂离不开优质的原料,如抗原抗体,酶等。以前用于免疫测定的抗原通常为各种纯化抗原,而抗体则为纯化抗原免疫动物后获得的多克隆抗体和使用杂交瘤技术得到的单克隆抗体,而抗原或抗体的标记物如酶标结合物则通过各种化学合成方法制备。近年来,随着分子生物学的发展,使用基因工程方法制备各种特殊的抗原或抗体及其酶结合物等免疫测定试剂几成为现实的新一代试剂,各种新型使用的测定方法也不断出现。
HBsAg试剂特点(检测模式:临床抗体夹心法):包被抗体为山羊多抗。多抗具有高亲和性和对抗原各种表位的反应性。酶表抗体为与HBsAg有不同结合位点的鼠复合单位,可测得HBsAg变异样品,提高检测的特异性(99.98%)提高检测的灵敏度,应用Parl Ehrich 学说(PEI)HBsAg标准品,对ad标准品的灵敏度为0.05ng/ml对ay标准品灵敏度为0.025ng/ml
ELISA检测试剂盒应用定性夹心免疫检测技术,用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板条,这些多肽是中国型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很强的肽段,分别来自于该毒株的开放阅读框2和开放阅读框3。将样品或标准品加入孔中并孵育,如果其中存在HEV IgM抗体,这些抗体就会与HEV 的多肽抗原结合,并固定在上面,洗板除去其它非特异性抗体和样品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP(辣根过氧化物酶)酶结合物,经第二次孵育后,酶结合物就会与第一次孵育结合上的HEV IgM抗体相结合,洗板除去未结合的酶结合物,加入TMB底物溶液,在第三次孵育时会发生酶-底物反应,只有那些含有HEV IgM抗体和酶结合物所形成的复合物的孔才会发生颜色变化,加入硫酸溶液终止酶和底物间的反应,并在波长: 450nm处测量O.D.值,按照本HEV IgM抗体elisa试剂盒的测试标准, O.D.值大于或等于Cut-Off值的样品被认为是初试阳性。
LISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,间接地放大了免疫反应的结果,使测定方法达到很高的敏感度。 ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。
然而,影响Elisa试验结果的因素很多,故加强各个环节的质量保证才能充分发挥其方法学的优点。
特点:一、高效、灵敏、特异的抗体; 二、稳定的重复性和可靠性; 三、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相载体; 四、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型; 五、节省实验经费。
elisa试剂盒回收率是反应待测物在样品分析过程中的损失的程度,损失越少,回收率越高,如果作标液1PPM,就是1毫克/升,而作出标准数据为0.99毫克/升,就是说你的回收率是99%,这个与真实成分有密切的关系,说明方法的准确度。比如水中总无机氯含量测定,样品水中含有无机氯20mg/L,取100mL被测水样品,加入0.1mL浓度为10mg/mL的含无机氯标准样品,测定时忽略体积变化,如果测定出样品中无机氯为2.98mg/L,则认为回收率为99%。
安全性
1. 避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。
2. 实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3. 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
4. 试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
5. 实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
6. 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
7. 使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。
8. 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
9. 洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
10. 底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
11. 加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
12. 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
elisa试剂盒测试要求
做好对照
正式试验时,应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件,待检样品应作一式二份,以保证实验结果的准确性。有时本底较高,说明有非特异性反应,可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。
实验条件的选择
在ELISA中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:
(1) 固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18~24小时。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD值最大而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。
(3) 酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
(4) 酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入。
检测范围和灵敏度不同,用量少时,可使用分装,前期是它的长久性不是很好。
试剂盒的标准曲线最高点OD 值均在2.0±0.2,零孔的OD 值都控制在0.10以下。
试剂盒的标准曲线相关系数R≥0.98。
试剂盒重复性好,板内、板间变异系数均<9 %。
试剂的组份都多给20%的富余量,确保完成48/96孔的检测,避免分次检测可能造成试剂量不足的情况。
检测抗体及酶结合物的稀释度合适(均为1:30), 方便试验操作者准确地做稀释工作,保证实验结果的重复性
ELISA法是免疫诊断中的一项新技术,现已成功地应用于多种病原微生物所引起的传染病、寄生虫病及非传染病等方面的免疫诊断。也已应用于大分子抗原和小分子抗原的定量测定,根据已经使用的结果,认为ELISA法具有灵敏、特异、简单、快速、稳定及易于自动化操作等特点。不仅适用于临床标本的检查,而且由于一天之内可以检查几百甚至上千份标本,因此,也适合于血清流行病学调查。本法不仅可以用来测定抗体,而且也可用于测定体液中的循环抗原,所以也是一种早期诊断的良好方法。因此ELISA法在生物医学各领域的应用范围日益扩大
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