人S100钙结合蛋白A7/钙粒蛋白A(S100A7)酶联免疫分析(ELISA)
试剂盒使用说明书
本试剂仅供研究使用 目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中S100钙结合蛋白A7/钙粒蛋白A(S100A7)的含量。
实验原理:
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人S100钙结合蛋白A7/钙粒蛋白A(S100A7)水平。用纯化的人S100钙结合蛋白A7/钙粒蛋白A(S100A7)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入S100钙结合蛋白A7/钙粒蛋白A(S100A7),再与HRP标记的S100钙结合蛋白A7/钙粒蛋白A(S100A7)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的S100钙结合蛋白A7/钙粒蛋白A(S100A7)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人S100钙结合蛋白A7/钙粒蛋白A(S100A7)浓度。
试剂盒组成:
(20ml×20倍)×1瓶 |
样本处理及要求:
1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。
3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤
1. 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在、第二孔中分别加标准品100μl,然后在、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为72ng/ml,48 ng/ml ,24 ng/ml,12ng/ml, 6ng/ml)。
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同3。
8. 洗涤:操作同5。
9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
注意事项:
1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2. 浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其性,以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请乘以总稀释倍数(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6. 底物请避光保存。
7. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8. 所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9. 本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。
计算:
以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,
在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD
值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释
倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标
准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值
代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释
倍数,即为样品的实际浓度。
(此图仅供参考)
试剂盒性能:
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.92以上。
2.批内与批见应分别小于9%和15%
检测范围:
2ng/ml -90 ng/ml
保存条件及期:
1.试剂盒保存:;2-8℃。
2.期:6个月
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产品规格:48T/96T实验样本:血清、血浆、细胞上清液、组织等。
检测种属:人、大小鼠、兔子等
保存条件:2~8℃,有效期6个月。
研究领域:炎症研究、神经生物学、新陈代谢、信号通路、免疫学、传染病、其他研究。
供应货期:现货
产品特点:经测定,试剂盒在有效期内按推荐温度保存,其活性降低率小于5%。为减小外部因素对试剂盒破坏前后检测值的影响,实验室的环境条件需尽量保持一致,尤其是实验室内温度、湿度及温育条件。其次由同一实验员来进行操作可减少人为误差。
优势:
1、采用全进口原料和抗体:高效、灵敏、特异,严格引进国际技术标准进行批量生产。
2、先进的优化方案:稳定的重复性和可靠性。
3、提供免费代测服务(为客户提供来样检测服务,最大限度实验结果的有效性)
4、产品质量保证,提供全程技术指导。友情提示:仅供科研实验,不得用于临床;使用前仔细阅读ELISA试剂盒说明书。其他相关产品:
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JEH-01 | Human CCL2/MCP-1 ELISA KIT | 96T/48T | 2200.00 |
JEH-02 | Human IL-1β ELISA KIT | 96T/48T | 2200.00 |
JEH-03 | | 96T/48T | 2200.00 |
JEH-04 | | 96T/48T | 2200.00 |
JEH-05 | | 96T/48T | 2200.00 |
JEH-06 | | 96T/48T | 2200.00 |
JEH-07 | | 96T/48T | 2200.00 |
JEH-08 | | 96T/48T | 2200.00 |
JEH-09 | | 96T/48T | 2200.00 |
JEH-010 | | 96T/48T | 2200.00 |
一.大肠杆菌宿主残留蛋白(E.coli P)elisa试剂盒现货原理及用途
大肠杆菌宿主残留蛋白(E.coli P)ELISA试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被人甲型肝炎抗原(HAA)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人甲型肝炎抗原(HAA)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。
二.技术参数规格
产品名称:大肠杆菌宿主残留蛋白(E.coli P)ELISA试剂盒现货
品牌:臻科生物
规格:48T/ 96T
产品特点:高效性、灵敏度高、吸附性强、特异型性好。
适用范围:产品仅供科研实验包括临床的标本做课题,不可用于临川诊断。储存方式:2-8摄氏度冷藏
供应的种属有:人、大鼠、小鼠、豚鼠、仓鼠、兔子、猪犬、牛羊、鸡鸭、植物、鱼ELISA试剂盒等等
三.大肠杆菌宿主残留蛋白(E.coli P)ELISA试剂盒现货独特优势
1、产品种类齐全、质量可靠、价格优惠、灵敏度高、效果稳定、易保存、操作简便
2、免费提供产品zui新报价、实验原理、产品用途及中英文说明书
3、发货及时(上海本地客户有专门人员送货上门及取标本)
4、免费提供ELISA代测服务,臻科拥有自己的实验室(北京、上海、武汉)和技术团队,公司提供全方位的售前、售中、售后技术支持,为您解决实验过程中遇到的问题。想要了解更多臻科实验代做服务,请来电咨询。
四.需要的器材
仪器:酶标仪、打印机、均质器 、氮气吹干装置、振荡器、离心机、刻度移液管、天平(感量0.01g)
微量移液器:单道20µl-200µl,100µl-1000µl、多道300µl
五.样本处理前须知:
1. 血清:将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜,然后1000×g离心20 分钟,取上清即可,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。2. 血浆:用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。3. 组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。
4. 细胞培养物上清或其它生物标本:请1000×g离心20分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
注:标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
六.大肠杆菌宿主残留蛋白(E.coli P)ELISA试剂盒现货操作流程
1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3. 样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
4. 除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
七.注意事项
1. 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。
2. 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。
3. 消除板底残留的液体和手指印,否则影响OD值。
4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色,已经变蓝的底物液不能使用。
5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。
6. 在储存和温育时避免强光直接照射。
7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。
8. 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。
9. 不能使用过期产品。
10. 如果可能传播疾病,所有的样品都应管理好,按照规定的程序处理样品和检测装置。
八.特别说明
由于不同指标检测的样本是不同的,处理方式也是不尽相同,如需了解更多,更详细的技术参数可联系我司客服专员,欢迎广大社会各界朋友前来咨询和了解。公司长期和全国各大高校、科研单位以及医院单位保持长期合作关系,产品品质保证,(非人为的)有任何质量问题包退换,可放心购买。
【英语名称】:Amplite Fluorimetric Goat Anti-Mouse IgG-HRP Conjugate ELISA Assay Kit *Red Fluorescence*
【中文名称】:Amplite 荧光法羊抗鼠IgG-HRP偶联物ELISA试剂盒 *红色荧光*
【产品类型】:免疫学试剂盒【供应商】:AAT Bioquest
【产品货号】:AAT-11540
【产品规格】:1 个试剂盒
【背景资料】:辣根过氧化物酶(HRP)是广泛用于多种生物学检测的小分子(MW~40KD)。HRP偶联物也被广泛用作ELISA(酶联免疫吸附实验)、免疫组化技术、Northern、 Southern和Western blot分析的第二个检测试剂。由于分子量小,因此在与抗体、抗原结合形成复合物时不会带来空间阻碍。它们按4:1的比例与抗体结合。此外,与其它酶标签相比,HRP更便宜。
【保存建议】:对于 Amplite 荧光法羊抗鼠IgG-HRP偶联物ELISA试剂盒 *红色荧光* 产品,我们推荐使用湿冰(又称蓝冰,约-20℃)进行运输。在您收到货物后,我们建议在低于-15℃温度下冷冻保存,要求储存环境干燥并避免光照。产品有效期为6个月。
【产品说明】:点击:Amplite 荧光法羊抗鼠IgG-HRP偶联物ELISA试剂盒 *红色荧光*查看更详细产品说明,更多应用、储存、价格、货期等信息请致电400-6800-868垂询AAT Bioquest中国区域授权总代理艾美捷科技有限公司。
美国AAT Bioquest Inc.(前身是ABD Bioquest,Inc.)是一家为从事生命科学研究、诊断研发及药物开发的科学家研发、生产和销售生物分析研究试剂和试剂盒的公司。公司致力于光谱学检测领域,包括显色、荧光和生物发光技术。AAT Bioquest的产品帮助全世界的科学家和生物医药研究者更好的了解生物化学,免疫学,细胞生物学和分子生物学等领域。作为AAT Bioquest Inc.的中国区域代理,艾美捷科技为中国客户提供光谱学检测技术并应用于生化、生理代谢和细胞分析领域的产品,包括显色,荧光和发光技术等全系列解决方案。