人B因子ELISA试剂盒
编号:JM21417E
英文名称:Human factor B,BF ELISA KIT
ELISA检测试剂盒应用定性夹心免疫检测技术,用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板条,这些多肽是中国型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很强的肽段,分别来自于该毒株的开放阅读框2和开放阅读框3。将样品或标准品加入孔中并孵育,如果其中存在HEV IgM抗体,这些抗体就会与HEV 的多肽抗原结合,并固定在上面,洗板除去其它非特异性抗体和样品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP(辣根过氧化物酶)酶结合物,经第二次孵育后,酶结合物就会与次孵育结合上的HEV IgM抗体相结合,洗板除去未结合的酶结合物,加入TMB底物溶液,在第三次孵育时会发生酶-底物反应,只有那些含有HEV IgM抗体和酶结合物所形成的复合物的孔才会发生颜色变化,加入硫酸溶液终止酶和底物间的反应,并在波长: 450nm处测量O.D.值,按照本HEV IgM抗体elisa试剂盒 的测试标准, O.D.值大于或等于Cut-Off值的样品被认为是初试阳性
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人B因子ELISA试剂盒
用途:本产品仅供科学研究
注意事项:1.请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请乘以总稀释倍数(×n×5)。2.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。3.底物请避光保存。4.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为Elisa 试验是一种敏感性高,特异性强,重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存,操作简便,结果判断较客观等因素,已广泛应用在免疫学检验的各领域中
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【产品名称】:人B因子elisa试剂盒科研
【英文名称】:Human factor B,BF elisa Kit
【检测种属】:大鼠等动植物。
【产品用途】:被测样品定性或定量分析
【产品规格】:48T
【检测方法】:酶免法/酶联免疫法(ELISA)
【保存条件】:2-8℃
【供 货 期】:1-3天(现货供应)
【产品性状】:液体盒装
【服务优势】:全程提供ELISA实验技术指导和elisa试剂盒免费代测
【样本储存】:收集标本前必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天进行检测的标本,储存在4℃备用,如有特殊原因需要周期收集标本,将标本及时分装后放在-20℃或-70℃条件下保存。避免反复冻融。标本2-8℃可保存48小时,-20℃可保存1个月。-70℃可保存6个月。部分激素类标本需添加抑肽酶。
人B因子elisa试剂盒科研洗涤方法:
1. 自动洗板机:每孔加入洗涤液350μl,注入与吸出间隔60秒。洗板5次。
2. 手工洗板:甩尽孔内液体,在洁净的吸水纸上拍干,每孔加洗涤液350μl,浸泡1-2分钟,吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体,在厚的吸水纸上拍干。洗板5次。
实验开始前,各试剂均应平衡至室温;试剂或样品配制时,均需充分混匀,并尽量避免起泡。
1.加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样时将样品加于酶标板底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。给酶标板覆膜,37℃孵育2小时。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。
2.弃去液体,甩干,每个孔中加入Detection Ab工作液 100μl(在使用前15分钟内配制),酶标板加上覆膜,37℃温育1小时。
3.弃去孔内液体,甩干,洗板 3次,每次浸泡1-2分钟,大约350μl /每孔,甩干并在吸水纸上轻拍将孔内液体拍干。
4.每孔加HRP Conjugate工作液(临用前15分钟内配制)100μl,加上覆膜,37℃温育1小时。
5.弃去孔内液体,甩干,洗板5次,方法同步骤3。
6.每孔加底物溶液100μl,酶标板加上覆膜37℃避光孵育15分钟左右(根据实际显色情况酌情缩短或延长,但不可超过30分钟。当标准孔出现明显梯度时,即可终止)。
7.每孔加终止液50μl,终止反应,此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。
8.立即用酶标仪在450nm波长测量各孔的光密度(OD值)。应提前打开酶标仪电源,预热仪器,设置好检测程序。
9.实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存至有效期结束。本公司专业经销人B因子elisa试剂盒科研长期为全国科研机构、高校和科研人员提供优质产品,在保证产品质量的同时,我们还配有扎实的售后技术咨询和服务,欢迎来电咨询。F2558-A | 人巨噬细胞替代激活相关化学因子1(AmAC-1)elisa试剂盒 |
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人B因子elisa试剂盒 参数:
编号 | 中文名称 | 英文名称 | 规格 |
F2556-B | 人B因子elisa试剂盒 | Human factor B,BF elisa Kit | 96T |
编号 | 中文名称 | 英文名称 | 规格 |
F2556-B | 人B因子elisa试剂盒 | Human factor B,BF elisa Kit | 96T |
人B因子elisa试剂盒 广泛应用在免疫学检验的各领域中,我们来介绍一下更简便的操作说明,编号:F2556-B,英文名称Human factor B,BF elisa Kit
1、人B因子elisa试剂盒 操作方法一用于检测未知抗原的双抗体夹心法:(1).包被:用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃ 过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。(简称洗涤,下同)。 (2).加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。 (3).加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小时,洗涤。 (4).加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。 (5).终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。 (6).结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。
2、人B因子elisa试剂盒 操作方法二:用于检测未知抗体的间接法: (1).用包被缓冲液将已知抗原稀释至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃过夜。次日洗涤3次。 (2).加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)(3).于反应孔中,加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml,37℃孵育30-60分钟,洗涤,最后一遍用DDW洗涤。 (4).于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟 (5).于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml (6).可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。 ELISA是一种敏感性高、特异性强、重复性好的实验诊断方法,由于其试剂稳定、易保存、操作简便、结果判断较客观等因素,以及既适宜于大规模筛查试验又可以用于少量标本的检测,既可以做定性试验也可以做定量分析等优点,已广泛应用于微生物学、寄生虫学、肿瘤学和细胞因子等领域。
3、临床标本的收集和保存 用于ELISA测定的临床标本最为常用的是血清(浆),有时因为特定的检测目的,也用到唾液、脑脊液、尿液、粪便等标本。目前临床上使用血清标本测定的标志物一般有传染性病原体的抗原和抗体、肿瘤标志物、激素、特种蛋白、细胞因子和治疗药物等。对用于激素和治疗药物测定的血清标本的收集,要注意收集时间甚或体位有可能会对测定结果产生影响。如可的松在早晨4~6点之间,会有一峰值出现:生长激素、促黄体激素(LH)和促卵泡激素(FSH)均以阵发性方式释放,因此,在测定此类激素时,有必要在密切相连的时间间隔内采取数份血样本,以其中间值为测定值。又如当从卧位变为站立位时,血清中肾素活性将出现明显增高。再如治疗药物的检测,应根据药代动力学选择服药后的最适时间抽血检测。用于传染性病原体的抗原和抗体、肿瘤标志物和特种蛋白等的检测的血清标本的收集则没有时间和体位方面的影响,只是在处理和保存方面要考虑。
(1)要注意避免出现严重溶血。血红蛋白中含有血红素基团,其有类似过氧化物的活性,因此,在以HRP为标记酶的ELISA测定中,如血清标本中血红蛋白浓度较高,则其就很容易在温育过程中吸附于固相,从而与后面加入的HRP底物反应显色。(2)样本的采集及血清分离中要注意尽量避免细菌污染,一则细菌的生长,其所分泌的一些酶可能会对抗原抗体等蛋白产生分解作用;二则一些细菌的内源性酶如大肠杆菌的β-半乳糖苷酶本身会对用相应酶作标记的测定方法产生非特异性干扰。(3)血清标本如是以无菌操作分离,则可以在2~8℃下保存一周,如为有菌操作,则建议冰冻保存。样本的长时间保存,应在-70℃以下。(4)冰冻保存的血清标本须注意避免因停电等造成的反复冻融。标本的反复冻融所产生的机械剪切力将对标本中的蛋白等分子产生破坏作用,从而引起假阴性结果。此外,冻融标本的混匀亦应注意,不要进行剧烈振荡,反复颠倒混匀即可。(5)标本在保存中如出现细菌污染所致的混浊或絮状物时,应离心沉淀后取上清检测。
4、试剂准备 在临床实验室,对试剂准备一般不太注意,通常的做法是,在实验时将试剂从冰箱中拿出来即用,而忽略了这种做法有可能影响后面温育时间不够的问题,其直接的后果是对一些弱阳性标本的检测出现假阴性。因此在ELISA测定中试剂的准备最为关键的是,在实验开始前,将试剂盒先从冰箱中拿出来,在室温下放置20分钟以上后,再进行测定,以使试剂盒在使用前与室温平衡。这样做的目的,主要是为了在后面的温育反应步骤中,能使反应微孔内的温度能较快地达到所要求的高度,以满足测定要求。其次,目前的商品ELISA试剂盒中的洗板液均需在实验室使用时对所提供的浓缩液稀释配制,因此稀释时所用的蒸馏水或去离子水应保证质量。此外,当试剂盒以OPD为底物时,则底物溶液应在反应显色前临时配制。
在现在的ELISA商品试剂盒中,血清样本的加入几乎是唯一的要使用微量加样器加入样本的步骤。使用微量加样器加样必须注意的关键点是:加样不可太快,要避免加在孔壁上部,不可溅出和产生气泡。加样太快,无法保证微量加样的准确性和均一性。加在孔壁上部的非包被区,易导致非特异吸附。溅出会对邻近孔产生污染。出现气泡则反应液界面有差异。试剂的加入在国产试剂盒中基本上均是从滴瓶中滴加,除了要注意滴加的角度外,滴加的速度也很重要,滴加太快,很容易出现重复滴加或加在两孔之间的现象,这样就会在孔内的非包被区出现非特异吸附,从而引起非特异显色。所以,有时候一份标本用相同的试剂盒这次测定为阳性,下次测定为阴性,往往就是上述加样及试剂的错误所致。
四、温育温育是ELISA测定中影响测定成败最为关键的一个因素。ELISA作为一种固相免疫测定,抗原抗体的结合反应在固相上进行,要使液相中的抗原或抗体与固相上的特异抗体或抗原完全结合,必须在一定的温度条件下反应一定的时间。温育所需时间与温度成反比,即温度越高,则所需时间相对较短。最为常用的温育温度有37℃和室温,其次是43℃和2~8℃。温育这一步是临床ELISA测定中最容易出现问题的步骤。通常目前国内ELISA商品试剂盒的反应温育时间为37℃ 30分钟~1小时,进口ELISA试剂盒则通常为37℃ 1~2小时才能有较完全的结合,低于1小时,可能会影响测定下限。因此,关于温育,在实际测定操作中一定要注意以下几点:要保证在设定的温度下有足够的反应时间。一般来说,加完样本和/或反应试剂后,将微孔板从室温拿至水浴箱或温箱中时,孔内温度从室温升至37℃,需要一定的时间,尤其是在室温比较低以及非水浴的状态下,这段升温时间可能还比较长,而在临床实验室中,很少有人注意这个问题,通常是将微孔板一放入温箱即开始计时,这样就很容易造成实际测定中温育时间不够,弱阳性样本测不出来的问题。曾有一地处南方的血站同行提出了一个问题,就是在每一年的冬季总有那么一个多月的时间,在做HBsAg测定的室内质控中,测定由卫生部临床检验中心供应的1 ng/ml弱阳性样本时,总是测不出来,不知原因为何?这可能就与南方冬天室内温度较低有关,此时微孔板转入温箱后37℃温育时间不够,以致弱阳性样本测定为阴性。因此,为保证37℃下足够的温育时间,临床实验室可自行确定本实验室不同季节(不同室温下)微孔板从室温拿至温箱后需要多长时间孔内温度才能达到37℃,从而适当延长板条在温箱中的放置时间。具体的做法是,用一小温度计放置板孔反应溶液中测量观察即可。
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人B因子elisa试剂盒 科研安全性:
1)避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。
2)实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3)不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
人B因子elisa试剂盒 科研检测:
1.将试剂盒从冷藏环境中取出并将所需试剂从试剂盒取出,置室温(20-25 ℃)平衡30 min以上, 注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
2.按需要取出微孔条及板架,将不用的微孔板重新密封,保存于2-8 ℃,不要冷冻。
3.加标准品/样本50 μL /孔,然后加入抗体工作液50 μL /孔,再振荡混匀,用封板膜盖板,37 ℃反应30 min。
4.洗板4-5次,每次浸泡30秒,拍干。
5.加入酶标记物100 μL /孔,用封板膜盖板,37 ℃反应20 min。
6.洗板4-5次,每次浸泡30 s,拍干。
7.显色:每孔加入底物缓冲液50 μL,再加底物液50 μL,轻轻振荡混匀,37 ℃环境避光显色10 min。
8.测定:每孔加入终止液50 μL,轻轻振荡匀,设定酶标仪于450 nm处(在20 min内读完数据),测定吸光度值。
人B因子elisa试剂盒 科研实验原理及类型:将已知抗体或抗原结合在某种固相载体上,并保持其免疫活性。测定时将待检标本和酶标抗体或酶标抗原按不同步骤与固相载体表面吸附的抗体或抗原发生反应,用洗涤的方法分离抗原抗体复合物和游离物成分,然后加入底物显色,进行定性或定量测定。ELISA可用于检测抗体,也可用于检测抗原。
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(BF)人B因子Elisa试剂盒 上海一基实业有限公司主要生产经营国家级标准物质/Elisa试剂盒,实验室耗材等。本着标准第一、质量第一,服务第一,信誉第一的宗旨,为客户提供售前.售中.售后的优质服务。我公司全体工作人员真诚的欢迎国内外客户的大力支持与合作。
(BF)人B因子Elisa试剂盒 Elisa试剂盒主要用于:科研使用,不得用于医学诊断.使用前仔细阅读本说明书。人Elisa,胶质细胞系来源的神经营养因子人Elisa试剂盒 现货供应,灵敏性高等特点。试剂盒 主要规格/保存方式:
(BF)人B因子Elisa试剂盒 规格:48T/96T,可以提供定量和定性。2-8℃(频繁使用时);-20℃(较长时间不用时)。