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上 传 者：杰辉生物（北京）科技发展有限公司
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实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中犬 BRD4。用纯化的犬 BRD4 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入 BRD4，再与 HRP 标记的 BRD4 抗体，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 BRD4呈正相关。用酶标仪在 450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中试剂盒组成
犬BRD4酶联elisa试剂盒操作步骤
1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
150?l的原倍标准品加入 150?l标准品稀释液
150?l的 5号标准品加入 150?l标准品稀释液
150?l的 4号标准品加入 150?l标准品稀释液
150?l的 3号标准品加入 150?l标准品稀释液
150?l的 2号标准品加入 150?l标准品稀释液
2.5pg/ml
加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、
待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50?l，待测样品孔中先加样品稀释液 40?l，然后再加待测样品 10?l（样品最终稀释度为 5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
温育：用封板膜封板后
37℃温育30分钟。
30倍稀释后备用
配液：将 30倍浓
洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静
重复 5次，拍干。
30秒后弃去，如此
加酶：每孔加入酶标试剂 50?l，空白孔除外。
温育：操作同 3。
洗涤：操作同 5。
显色：每孔先加入显色剂 A50?l，再加入显色剂 B50?l，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
10分钟.
10.终止：每孔加终止液 50?l，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止
液后 15分钟以内进行。
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