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免疫组化ABC法操作步骤
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免疫组化ABC法操作步骤
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1、4%多聚甲醛常规灌注固定，取材并置20%蔗糖溶液（4℃）过夜，蜡块制作，切片，贴片。0.01M PBS清洗5min×3次;
2、脱蜡、水化：用二甲苯两次10min，用梯度乙醇由低浓度到高浓度进行水化;
3、加入0.3%的过氧化氢甲醇溶液（甲醇80ml+0.01M PBS 100ml+30%过氧化氢）30min，以消除内源性过氧化物酶的影响，0.01M PBS清洗5min×3次;
4、加入0.3% Triton X-100（0.3ml Triton X-100+0.01 M PBS 100ml）30min，以增加细胞的通透性，0.01M PBS清洗5min×3次;
5、加入用血清稀释液（牛血清白蛋白1.00g+0.01M PBS 100ml+叠氮纳0.08g）稀释的一抗，4℃存放24-48h。吸去抗体，0.01M PBS洗5min×3次;
6、加入0.01M PBS稀释的的二抗，室温孵育2h。0.01M PBS洗5min×3次;
7、加入ABC复合物之类的抗体，室温孵育2h，0.01M PBS洗5min×3次;蒸馏水迅速冲三次;
8、加入显色液，进行免疫组织化学显色，时间一般3~10min，可不时在显微镜下进行观察，待细胞着色而背底颜色较淡时马上吸去显色液，用蒸馏水迅速冲三次后加入0.01M PBS终止反应;
9、苏木素复染;
10、梯度酒精脱水之后，透明，封片，拍照。
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