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进口elisa试剂盒的制备

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上传时间:2014/2/24 9:41:54

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上 传 者:杰辉生物(北京)科技发展有限公司

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  进口elisa试剂盒的制备

试剂盒组成

 

1
30倍浓缩洗涤液 20ml×1瓶
7
终止液 6ml×1瓶
2
酶标试剂 6ml×1瓶
8
标准品(3200μmol/L) 0.5ml×1瓶
3
酶标包被板 12孔×8条
9
标准品稀释液 1.5ml×1瓶
4
样品稀释液 6ml×1瓶
10
说明书 1份
5
显色剂A液 6ml×1瓶
11
封板膜 2张 
6
显色剂B液 6ml×1/瓶
12
密封袋 1个

 

标本要求
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤
1.         标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

 

1600μmol/L 5号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
800μmol/L 4号标准品 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
400μmol/L 3号标准品 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
200μmol/L 2号标准品 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
100μmol/L 1号标准品 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液
2.         加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.         温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。  

 

4.         配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5.         洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6.         加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7.         温育:操作同3。
8.         洗涤:操作同5。
9.         显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
10.     终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11.     测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

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