(产品编号:1805-9)
1、 前言介绍
病人出现即时过敏反应时通常都会伴随出现循环血浆IgE抗体(针对其相应抗原的抗体)浓度的提高。常见的过敏原有:花粉、霉菌、酵母、真菌孢子、尘螨、其它空气吸入剂、普通食物及昆虫叮咬,一些药物和化妆品也可能出现过敏反应,不过这种情况很少见。自动诊断公司的人过敏原特异性IgE检测试剂采用塑料包被板条,检测板的微孔上包被了过敏原蛋白。将血清或血浆加入到微孔中,并用辣根过氧酶标记的抗人IgE抗体检测结合到包被板上的IgE抗体。极端敏感的TMB/过氧化物底物液用来检测酶的量,底物的反应量与结合到特异性抗原上的特异性IgE抗体浓度正比。此种方法已与经典RAST方法进行比较过。
我们可以提供400多种储存过敏原,如果客户要求的话,我们也可以生产或者得到其它的过敏原。我们通常都是使用12空的板条,每个微孔中都包被了不同的抗原。将8条这样的板条固定在一个标准微孔板架上。换句话说,96孔的板条可以供8个病人检测12种过敏原。我们还可以根据客户的要求提供各种各样的盒子。但这种要求必须与世界各地流行的过敏原的季节性和可变性相一致。
2、 应用范围
此试剂盒可用于人过敏原特异性IgE的定性和定量检测。注意:在开始过敏原特异性IgE实验前,请确定是检测样品中的总IgE抗体。
3、 试剂盒成分
1) 12*8的抗原包被板条
2) 辣根过氧酶包被的单克隆抗人IgE,2*12ml
3) TMB/过氧化物底物显色液II,30ml
4) 硫酸终止液(0.5N),2*12ml
5) 15倍浓缩的洗涤液,60ml
4、 实验步骤
注意:所有的人体液都必须当作携带有HIV的传染病试剂进行处理。
将包被了过敏原的包被板固定在塑料板架上,并标上相应的病人名字或病人ID号。
1) 将所有的试剂都平衡至25℃
2) 在每一微孔中加入100ul的血清或血浆
3) 25℃下温育2小时,但温度不能超过30℃
4) 弃取孔内反应液,每孔用洗涤液(见试剂准备)洗板5次,最后一次洗板后在吸水纸上拍干。
5) 在每一微孔中加入100ul辣根过氧酶标记的单克隆抗人IgE抗体。
6) 如步骤3,温育2小时。
7) 弃取孔内反应液,按步骤4洗板
8) 在每一微孔中加入100ul TMB/过氧化物底物液
9) 25℃下温育30分钟,但温度不能超过30℃
10) 在每一微孔中加入100ul终止液(0.5N的硫酸)
11) 450nm处读取OD值,
5、 结果说明
450nm处的OD值:
0.000-0.250 = 阴性
0.251-0.350 = I级
0.351-0.450 = II级
0.451-0.550 = III级
>0.550 = IV级
6、 试剂准备
洗涤液:
实验开始前,用14份试剂级水稀释1份15倍浓缩的洗涤液。充分混匀并将配置好的洗涤液储存到塑料挤瓶中。