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鳖孕酮(P)说明书

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上传时间：2012/12/12 15:29:18

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上传者：博研生物科技有限公司上海分公司

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鳖孕酮（P）实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鳖孕酮（P）水平。用纯化的鳖孕酮（P）抗体包被微
孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入孕酮（P），再与 HRP 标记的孕酮（P）抗体
结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB显色。TMB在HRP
酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的孕酮（P）
呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中鳖孕
酮（P）浓度。
鳖孕酮（P）试剂盒组成
1 20倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶 7 终止液 3ml ×1 瓶
2 酶标试剂 3ml ×1 瓶 8 标准品（160μg/L ） 0.5ml×1 瓶
3 酶标包被板 12孔×4 条 9 标准品稀释液 1.5ml×1 瓶
4 样品稀释液 3ml ×1 瓶 10 说明书 1 份
5 显色剂A 液 3ml ×1 瓶 11 封板膜 2 张
6 显色剂B 液 3ml ×1/ 瓶 12 密封袋 1 个
鳖孕酮（P）标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因 NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP ）活性。
操作步骤
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
80μg/L 5 号标准品 150μl 的原倍标准品加入 150μl 标准品稀释液
40μg/L 4 号标准品 150μl 的5 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
20μg/L 3 号标准品 150μl 的4 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
10μg/L 2 号标准品 150μl 的3 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
5μg/L 1 号标准品 150μl 的2 号标准品加入 150μl 标准品稀释液
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、
待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，
然后再加待测样品 10μl（样品最终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽
量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置 37℃温育30 分钟。
4. 配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水 20倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30秒后弃去，如此
重复5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同 3。
8. 洗涤：操作同 5。
9. 显色：每孔先加入显色剂 A50 μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15分钟.
10. 终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止
液后15分钟以内进行。