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大鼠白细胞介素12（IL-12）酶联免疫分析
点击次数： 494发布时间：2015/8/21 8:50:47
- 上 传 者： shhybio
- 上传时间： 2015/8/21 8:50:47
- 文件大小： 13KB
- 文件类型： jpg
- 所属分类： 应用方法
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资料简介： 本试剂盒仅供研究使用。 检测范围： 96T 2 ng/L -80 ng/L 使用目的： 本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中白细胞介素12（IL-12）含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠白细胞介素12（IL-12）水平。用纯化的大鼠白细胞介素12（IL-12）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入白细胞介素12（IL-12），再与HRP标记的白细胞介素12（IL-12）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的白细胞介素12（IL-12）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠白细胞介素12（IL-12）浓度。 试剂盒组成 1 30倍浓缩洗涤液 20ml×1瓶 7 终止液 6ml×1瓶 2 酶标试剂 6ml×1瓶 8 标准品（160 ng/L） 0.5ml×1瓶 3 酶标包被板 12孔×8条 9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶 4 样品稀释液 6ml×1瓶 10 说明书 1份 5 显色剂A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2张 6 显色剂B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1个 标本要求 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 操作步骤 1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。 80 ng/L 5号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液 40 ng/L 4号标准品 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液 20 ng/L 3号标准品 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液 10 ng/L 2号标准品 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液 5 ng/L 1号标准品 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液 2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 4.配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用 5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。 6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 7.温育：操作同3。 8.洗涤：操作同5。 9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃ 避光显色15分钟. 10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
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