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土壤脲酶(S-UE)测试盒
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详细内容
土壤脲酶(S-UE)活性检测试剂盒说明书
注意:正式测定之前选择预期差异大的样本做预测定。微量法
产品内容:
试剂一:甲苯2mL×1 瓶,4℃保存;(自备)
试剂二:粉剂×1 瓶,临用前加入9mL 蒸馏水,充分溶解待用,4℃保存;用不完的试剂4℃保存;
试剂三:液体19mL×1 瓶,4℃保存;
试剂四A 液:液体0.4mL×1 支,4℃保存;
试剂四B 液:液体1.6mL×1 瓶,4℃保存;临用前将A 液倒入B 液中混合,待用;用不完的试剂4℃保存一周;
试剂五:液体 2mL×1 瓶,4℃保存;
标准品:液体 1mL×1 支,1mg/mL 氮标准液。
产品说明:
S-UE能够水解尿素,产生氨和碳酸。土壤脲酶活性与土壤的微生物数量、有机物质含量、
全氮和速效氮含量呈正相关。土壤脲酶活性反应了土壤的氮素状况。利用靛酚蓝比色法测定脲酶水解尿素产生的NH3-N。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵、冰、甲苯
(不允许快递)和蒸馏水。
操作步骤:
a. 培养
测定管 | 对照管 | |
风干土样(g) | 0.05 | 0.05 |
试剂一(µL) | 20 | 20 |
振荡混匀,使土样全部湿润,室温放置 15min | ||
试剂二(µL) | 90 | |
蒸馏水(µL) | 90 | |
试剂三(µL) | 190 | 190 |
混匀,放入 37℃水浴培养 24h 后,10000g 常温离心 10min,取上清液。 | ||
b. 将培养结束的上清液稀释10 倍(取0.1mL 上清液,加入0.9mL 蒸馏水)。若终计算得到的
ΔA仍大于0.5继续稀释。
c. 标准品的准备:吸取适量的标准溶液,稀释至10、8、6、4、2、1、0.5、0µg/mL。
d. 测氨量(在微量玻璃比色皿或96 孔板中加入下列试剂)
测定管 | 对照管 | 标准管 | |
稀释后的上清液(µL)/标准品 | 80 | 80 | 80 |
试剂四(µL) | 15 | 15 | 15 |
试剂五(µL) | 15 | 15 | 15 |
充分混匀,室温放置 20min | |||
蒸馏水(µL) | 90 | 90 | 90 |
混匀,于 630nm 处,蒸馏水调零,读吸光值 A,计算ΔA=A 测定管-A 对照管。每个测定管设一个对照管。标准曲线的建立:根据标准管的浓度(y)和吸光度(x,减去浓度为 0 的空白管),做标准曲线。
脲酶活力计算
根据标准曲线,将ΔA带入公式(x)计算测定中样品的浓度(µg/mL)y值。单位的定义:每天每g土样中产生1µgNH3-N定义为一个酶活力单位。
脲酶活力(U/g 土样)=y×10×V反总÷W÷T=60×y
10:稀释倍数;T:反应时间,1d;V反总:反应体系总体积,0.3mL;W:样本质量,0.05g。

热门标签:生化,土壤脲酶(S-UE)活性检测试剂盒,微量法













