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RNA免疫共沉淀测序 (RIP-seq)

RNA免疫共沉淀测序 (RIP-seq)

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更新日期:2024/7/31 10:50:21

生 产 地:中国大陆

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简单介绍:RIP-seq是将RNA免疫共沉淀(RNA Immunoprecipitation,RIP)与二代测序技术(NGS)相结合以研究细胞内RNA与蛋白互作的技术,RIP利用目标蛋白抗体把相应的RNA-蛋白复合物(RNA Binding Protein,RBP)沉淀下来,然后经过富集和纯化就可以对结合在复合物上的RNA进行测序分析。

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详细内容

RIP-seq是将RNA免疫共沉淀(RNA Immunoprecipitation,RIP)与二代测序技术(NGS)相结合以研究细胞内RNA与蛋白互作的技术,RIP利用目标蛋白抗体把相应的RNA-蛋白复合物(RNA Binding Protein,RBP)沉淀下来,然后经过富集和纯化就可以对结合在复合物上的RNA进行测序分析。


RIP-seq对富集得到的RNA pian段通过高通量测序,在全转录组范围内对细胞内RNA与蛋白结合情况进行分析,揭示RNA分子与RBP互作(包括非编码RNA与蛋白互作)。RIP-seq是了解转录后调控网络动态过程的有力工具,能发现miRNA的调控靶点。


技术优势:

1、全转录组覆盖:可在全转录组范围对蛋白结合位点进行筛选与鉴定。

2、高灵敏度:每个样本可获得数百万条的序列标签,检测转录本上更多的蛋白结合位点。

3、高精确率:可获得高水平的信噪比数据,准确区分真实事件与噪音。

4、多种商品化抗体,高效支持实验开展。


实验策略:image.png

分析内容:image.png


应用领域:

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送样要求:

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案例解析:

SRSF6调控可变剪接促进肿瘤进展,为结直肠癌(CRC)提供治疗靶点

SRSF6-regulated alternative splicing that promotes tumour progression offers a therapy target for colorectal cancer


设计:

对311个CRC样本、癌症基因组图谱和基因表达综合数据库(GEO)数据库中SRSF6的表达进行分析。通过RIP-seq鉴定SRSF6调控的可变剪接(AS)及其结合位点,并通过凝胶迁移和微基因报告实验进行验证。

结果:

SRSF6在CRC样本中上调,并与不良预后相关,在体外和体内促进增殖和转移。鉴定出SRSF6调控的AS靶标,并揭示SRSF6结合位点。SRSF6通过直接结合到其23号外显子位点来调控ZO-1异常剪接,从而作为癌基因发挥作用。Indacaterol被鉴定为SRSF6抑制剂,以抑制CRC肿瘤发生。

结论:

S R S F 6 通过调控A S 介导促进C R C 进展,Indacaterol通过靶向SRSF6被定位为抗肿瘤药物。


image.png

RIP-seq鉴定SRSF6调控的AS事件和RNA结合motif



参考文献:

Wan L, Yu W, Shen E, et alSRSF6-regulated alternative splicing that promotes tumour progression offers a therapy target for colorectal cancer.Gut 2019;68:118-129.

RNA甲基化,RNA免疫共沉淀测序,全转录组

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