Rosetta-gami B 感受态

产品简介 Rosetta-gami B 系列菌株来源于 Origami B 系列菌株，是集合了 BL21 系列，Rosetta 系列菌株和 Origami 系列菌株的优点，极大的增强了细胞内二硫键的形成和含有在大肠杆菌中稀有密码子的真 核细胞蛋白的表达能力。Rosetta-gami B系列菌株是来源于 Origami B系列菌株，携带有TrxB和Gor 基因突变，提高含二硫键正确折叠 蛋白的高效表达。本菌株含有 pRARE 质粒，能够提供原 Rosetta(DE3)宿主菌含有 的 AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, 和 GGA 六个稀有密码子的 tRNA 外，增 加了真核细胞的在大肠杆菌中的蛋白表达水平。在 thioredoxin reductase (trxB)和 glutathione reductase (gor)基因上同时含有突变，这使得该菌株能够更加高效的在细胞质内生成二硫键，有助于含二硫 键蛋白的活性蛋白形成。TrxB 和 Gor 基因突变使得质粒能够分别具有卡那和四环素抗性，所以本 菌株无法用于卡那和四环素抗性质粒的蛋白表达。Rosetta-gami B感受态细胞来源于含有 BL21系列 菌株中的 lacZY 基因突变，能够通过 IPTG 高效控制目的基因的表达。Rosetta-gami B 感受态细胞能 够用于氨苄抗性和壮观霉素抗性质粒的原核表达。Rosetta-gami B 感受态细胞经特殊工艺制作， pUC18 质粒检测转化效率>108 cfu/µg DNA。 产品组成 组分 Rosetta-gami B 感受态细胞 10 × 100 µL 100 × 100 µL 定制 基因型：F- ompT hsdSB (rB-mB-) gal dcm lacY1 ahpC gor522::Tn10 trxB pRARE (CamR , KanR , TetR) 存储条件 -80 ℃保存；请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。 质量控制 无外源质粒 DNA 残留； 化学法转化效率≥108 cfu/µg pUC18 DNA。 使用方法 1. 将感受态细胞从-80 ℃中取出，置于冰水浴中融化； 2. 将待转化 DNA 加入到 100 µL 感受态细胞中，轻轻弹匀，冰上孵育 30 min； 3. 将离心管置于 42 ℃水浴锅中，不要晃动，热激 90s 后，立刻置于冰水浴中静置 2-3 min； 4. 向离心管中加入 900µL LB 或 SOC 培养基（室温或 37 ℃预热），然后置于 37 ℃摇床复壮 45 min； 5. 取不同体积的转化产物，用无菌涂布棒均匀涂布于正确抗性的平板上，于 37 ℃培养箱培养过夜。 注意事项 1. 感受态细胞冰水浴中解冻后应立即使用； 2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10； 3. 加入待转化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受态细胞，仅用手指轻弹即可； 4. 为确保*高转化效率，整个操作过程中除热激外均要保持低温，并且要尽量轻柔。