Rosetta-gami B (DE3)感受态

产品简介 Rosetta-gami B 系列菌株来源于 Origami B 系列菌株，是集合了 BL21 系列、Rosetta 系列菌株和 Origami 系列菌株的优点，极大的增强了细胞内二硫键的形成和含有在大肠杆菌中稀有密码子的真 核细胞蛋白的表达能力。本菌株含有 pRARE 质粒，能够提供原 Rosetta(DE3)宿主菌含有的 AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, 和 GGA 六个稀有密码子的 tRNA，增加了真核细胞的在大肠杆菌中的蛋白 表达水平。在 thioredoxin reductase (trxB)和 glutathione reductase (gor)基因上同时含有突变，这使得 该菌株能够更加高效地在细胞质内生成二硫键，有助于表达含二硫键的活性蛋白。pRARE 质粒带 有氯霉素抗性，同时基因 trxB 和 gor 的突变使得该菌株具备了卡那和四环素抗性，所以本菌株无法 用于含氯霉素、卡那和四环素抗性质粒的蛋白表达。Rosetta-gami B(DE3)系列菌株是来源于 Origami B 系列菌株，其中 DE3 是溶源性的 λDE3, 所以带有 T7 RNA 聚合酶的染色体拷贝。该菌株 适用于 pET 系列载体，及其他 T7 启动子系列载体。经 pUC18 质粒转化检测，Rosetta-gami B(DE3) 感受态细胞的转化效率可达 108 cfu/µg DNA。 产品组成 组分 Rosetta-gami B(DE3) 化学感受态细胞 10 × 100 µL 100 × 100 µL 定制 基因型：F– ompT hsdSB (rB-mB-) gal dcm lacY1 ahpC (DE3) gor522::Tn10 trxB pRARE (CamR, KanR, TetR) 存储条件 -80 ℃保存；请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。 质量控制 除 pRARE 质粒外，无外源质粒 DNA 残留； 化学法转化效率≥108 cfu/µg pUC18 DNA。 使用方法 1. 将感受态细胞从-80 ℃中取出，置于冰浴中融化； 2. 将待转化 DNA 加入到 100 µL 感受态细胞中，轻轻弹匀，冰上孵育 30 min； 3. 将离心管置于 42 ℃水浴锅中，不要晃动，热激 90s 后，立刻置于冰浴中静置 2-3 min； 4. 向离心管中加入 900 µL LB 或 SOC 培养基（室温或 37 ℃预热），后置于 37 ℃摇床复壮 45 min； 5. 取不同体积的转化产物，用无菌涂布棒均匀涂布于正确抗性的平板上，于 37 ℃培养箱培养过夜。 注意事项 1. 感受态细胞冰浴中解冻后应立即使用； 2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10； 3. 加入待转化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受态细胞，仅用手指轻弹即可； 4. 为确保*高转化效率，整个操作过程中除热激外均要保持低温，并且要尽量轻柔。