Rosetta-gami B (DE3)pLysS 感受态

产品简介 Rosetta-gami B 系列菌株来源于 Origami B 系列菌株，是集合了 BL21 系列、Rosetta 系列菌株和 Origami 系列菌株的优点。该系列菌株携带有 trxB 和 gor 基因突变，可以高效表达含二硫键的蛋白； 此外，由于能够提供原 Rosetta(DE3)宿主菌含有 的 AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, 和 GGA 六个稀有 密码子的 tRNA，因而能够提高真核蛋白在大肠杆菌中的表达水平。该菌株含有氯霉素、卡那和四 环素抗性，所以无法转化含这些抗性的质粒，但是可以用于氨苄抗性和壮观霉素抗性质粒的原核 表达。Rosetta-gami B(DE3) pLysS 可高效表达 T7 RNA 聚合酶，因而适用于 pET 系列载体及其他 T7 启动子系列载体。含有的 pLysSRARE 质粒可以表达 T7 溶菌酶来有效降低目的基因的本底表达水 平。pLysSRARE 质粒的起始复制位点是 p15 Origin，其可以与 pUC-及 pBR322-衍生的质粒互相共 存。经 pUC18 质粒转化检测，Rosetta-gami B (DE3) pLysS 感受态细胞的转化效率可达 107 cfu/µg DNA 以上。 产品组成 组分 Rosetta-gami B (DE3) pLysS 化学感受态细胞 10 × 100 µL 100 × 100 µL 定制 基因型：F– ompT hsdSB (rB– mB–) gal dcm lacY1 ahpC (DE3) gor522::Tn10 trxB pLysSRARE (CamR, KanR, TetR) 存储条件 -80 ℃保存；请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。 质量控制 除 pLysSRARE 质粒外，无外源质粒 DNA 残留； 化学法转化效率≥107 cfu/µg pUC18 DNA。 使用方法 1. 将感受态细胞从-80 ℃中取出，置于冰浴中融化； 2. 将待转化 DNA 加入到 100 µL 感受态细胞中，轻轻弹匀，冰上孵育 30 min； 3. 将离心管置于 42 ℃水浴锅中，不要晃动，热激 90s 后，立刻置于冰浴中静置 2-3 min； 4. 向离心管中加入 900 µL LB 或 SOC 培养基（室温或 37 ℃预热），后置于 37 ℃摇床复壮 45 min； 5. 取不同体积的转化产物，用无菌涂布棒均匀涂布于正确抗性的平板上，于 37 ℃培养箱培养过夜。 注意事项 1. 感受态细胞冰浴中解冻后应立即使用； 2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10； 3. 加入待转化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受态细胞，仅用手指轻弹即可； 4. 为确保*高转化效率，整个操作过程中除热激外均要保持低温，并且要尽量轻柔。