GV3101感受态

产品简介 GV3101菌株为C58型背景，核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因Rif，为了便于转化操作， 此菌株携带一无自身转运功能的胭脂碱型 Ti 质粒 pMP90 (pTiC58DT-DNA)，此质粒含有 vir 基因 (vir 基因是 T-DNA 插入植物基因组必需的元件，pMP90 (pTiC58DT-DNA)质粒自身的 T-DNA 转移 功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体 T-DNA 顺利转移)。pMP90 (pTiC58DT-DNA)型 Ti 质粒含 有筛选标签：Gent，赋予 GV3101 菌株庆大霉素抗性，适用于拟南芥、烟草、玉米、土豆等植物的 转基因操作，本公司生产的 GV3101 化学转化感受态细胞经特殊工艺制作，pCAMBIA2301 质粒检 测转化效率≥ 104 cfu/µg DNA。 产品组成 组分 GV3101 化学感受态细胞 10 × 100 µL 100 × 100 µL 定制 基因型：C58 (RifR) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) ( GentR) Nopaline 存储条件 -80 ℃保存；请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。 质量控制 除胭脂碱型 Ti 质粒 pMP90 外，无外源质粒 DNA 残留； 化学法转化效率≥104 cfu/µg DNA。 使用方法 1. 将感受态细胞从-80 ℃中取出，置于冰浴中融化； 2. 将待转化 DNA 加入到 100 µl 感受态细胞中，用手拨打管底混匀，依次于冰上静置 10 分钟、液氮 5 分钟（或干冰乙醇浴和-80 ℃冰冻）、37℃水浴 5 分钟、冰浴 5 分钟； 3.加入 900 µl 无抗生素的 YEB 液体培养基，于 28 ℃振荡培养 2~3 小时； 4. 6000 rpm 离心一分钟收菌，留取 100 µl 左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的 YEB 平板上，倒置放于 28℃培养箱培养 2-3 天（当平板只含有 50 µg/ml Kan 时，28 ℃培养 48 h 即可；平 板中同时加入 50 µg/ml Kan，20 µg/ml Rif 时，需 28℃培养 60 h；如果使用的平板含有 50 µg/ml Rif 则需 要 28℃培养 72-90 h）。 注意事项 1. 感受态细胞冰浴中解冻后应立即使用； 2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10； 3. 利福平浓度不应高于 25 µg/µl，利福平浓度过高不利于农杆菌生长，会降低其生长速度和转化效率。 4. 由于 Ti 质粒丢失的概率极低（可以忽略），所以相关抗性基因可以不用添加。