MSU440感受态（电转）

产品简介 发根农杆菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)农杆菌属(agrobacterium)的一种革兰氏阴性土壤细菌，它能够 感染大多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。 MSU440 发根农杆菌菌株含有农杆 碱型 Ri 质粒，具有广泛的宿主范围（玉米，烟草，茶树，青蒿等），同时具有链霉素抗性。本公 司生产的 MSU440 电转化感受态细胞经特殊工艺制作，pCAMBIA2301 质粒（卡那霉素抗性）检 测， 转化效率>105 cfu/µg DNA。 产品组成 组分 MSU440 电转感受态细胞 10 ×50 µL 100 ×50 µL 定制 基因型：Agrobacterium rhizogenes(StrR ) MSU440 Ri (agropine type) 存储条件 -80 ℃保存; 请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。 质量控制 除农杆碱型 Ri 质粒外，无外源质粒 DNA 残留； 电转法转化效率≥105 cfu/µg DNA 使用方法 1. 将新的 2 mm 电击杯插入冰中预冷；或者将储存于 75%乙醇中的 2 mm 电击杯和杯盖取出，在超净工 作台中将其倒置于干净的吸水纸上，使乙醇充分挥发，然后插入冰中预冷； 2. 取-80℃保存的农杆菌感受态插入冰中待其融化，加入 0.01-1 µg 质粒 DNA（体积不大于 5 µl），用 200 µl 枪头将感受态-质粒混合物快速转移到预冷的电击杯中，盖上杯盖； 3. 开启电转仪，设置参数（2500 V ，200 Ω，25 µF），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成后快速插 入冰中，加入 900µl 无抗生素的 YEB 并将感受态细胞转移到无菌空管中，28 ℃振荡培养 2~3 小时。 （注：此电转化参数为 Bio-rad 推荐，使用者也可使用电转仪所推荐的 Protocol 进行操作） 4. 6000 rpm 离心一分钟收菌，留取 100µl 左右上清将菌体轻轻吹匀，并涂布于含相应抗生素的 YEB 平板 上，倒置放于 28℃培养箱培养 2~3 天。 注意事项 1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的 1/10； 2. 电转感受态细胞中不可混入气泡，转化高浓度的质粒可相应减少*终用于涂板的菌量； 3. 平板上阳性克隆密度不宜过大，为了获得大的菌落，应减少质粒用量或*终用于涂板的菌量； 4. MSU440 具有链霉素抗性，不可用于具有链霉素抗性质粒的转化。