BL21感受态

产品概述 产品描述 BL21是*早开发的用于原核表达的菌株，BL21(DE3)、Rosetta、OrigamiB(DE3) 等一系列原核表达菌株均来源于BL21菌株。该菌株主要用于非毒性蛋白的表达，不含T7 RNA聚合酶，所以不能用于由T7启动子驱动的蛋白表达(如：pET系列)；但含有大肠杆菌RNA聚合酶，适合依赖于大肠杆菌RNA聚合酶的原核系统的表达(如：pGEX，pMAL质粒)。其中ompT可减少外膜蛋白酶的表达量，从而减少重组蛋白的水解，提高表达产量；hsd基因变异可致菌株细胞内的I型限制酶EcoK或EcoB活性缺失，从而提高PCR产物的转化效率。BL21感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率达107 cfu/µg DNA。 产品优势 ✽ 高转化效率：>1x107 cfu/µg pUC19 DNA ✽ 适合依赖于大肠杆菌RNA聚合酶的原核系统的表达 产品组分 组分 CC96194-01 CC96194-02 BL21感受态细胞 10 × 100 µL 100 × 100 µL 基因型：E. coli B F- dcm ompT hsdS(rB- mB-) gal [malB+]K-12(λS) 产品应用 BL21感受态细胞适用于依赖于大肠杆菌RNA聚合酶的原核系统的表达(如：pGEX，pMAL质粒)。 实验流程 1. 解冻感受态细胞：从-80 ℃取感受态细胞，放置在冰浴或冰水浴中融化，约5-10 min，放置时间过长会影响转化效率。 2. DNA样品的转化：每100 µL感受态加入待转化DNA样品(例如质粒、连接产物或重组产物等)约10 µL，然后轻轻弹击管底约2-3次，立即冰上静置孵育30 min。 ✽ 加入待转化DNA样品体积通常不宜超过感受态细胞体积的10%。 ✽ 加入待转化DNA样品后应轻柔操作，避免使用移液枪吹打混匀。 ✽ 如果用于质粒的转化扩增，冰浴静置约10 min后可以直接涂板并培养过夜；如果用于连接产物或重组产物的转化，建议冰浴静置30分钟并严格执行后续的热激处理和复苏培养等步骤，以提高转化效率。 3. 热激处理：将冰浴后的离心管快速置于42℃水浴中，静置热激90 s。随后立即转移至冰水浴中静置2-3 min以快速冷却。 ✽ 热激及转移至冰浴过程中请勿晃动离心管。 4. 复苏培养：加入900 µL 37℃预热的LB或SOC培养基，颠倒数次混匀，37℃摇床约220 rpm复苏培养45 min。 5. 收菌涂板：如果用于质粒的转化扩增，建议直接取50-100 µL进行涂板即可；如果用于连接产物或重组产物的转化，建议先5000 g，1 min室温离心沉淀细菌，吸除约900-950 µL上清，然后用剩余的约50-100 µL菌液重悬，涂布到含相应抗生素的LB平板上。 6. 过夜培养：将平板倒置放于37℃培养箱培养过夜。 ✽ 培养前需要将平板在超净台中稍微晾至无明显水渍，有利于形成单克隆。 保存条件 -80℃保存；请勿将本品置于-20℃或者液氮中保存。 相关参数 感受态类型 化学感受态 感受态菌株名称 BL21 种属 大肠杆菌 转化效率 高效率 (>1x10^7 cfu/µg pUC19 DNA) 菌株用途 表达 应用特征 适用于依赖于大肠杆菌RNA聚合酶的原核系统的表达 是否可进行蓝白斑筛选 否 菌株抗性 - 培养基 LB 培养条件 37℃，有氧 诱导方法 - 保存条件 -80℃ 运输条件 干冰 包装规格 管装 (100 µL/管)