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毕赤酵母宿主蛋白(HCP)残留检测试剂盒96T
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详细内容
毕赤酵母宿主蛋白(HCP)残留检测试剂盒
(货号:PH-E0021-1)
一、背景介绍
毕赤酵母宿主蛋白(HCP)残留检测试剂盒,本试剂盒是用来定量分析以毕赤酵母(Pichia Yeast)为表达系统时,蛋白药物中宿主细 胞残留蛋白。 毕赤酵母作为常用的表达系统在表达目的蛋白的同时,会伴随着表达细胞自身凋亡,资 料显示细胞破碎后释放到培养基中的宿主蛋白达上千种之多,其中很大一部分具有很强的免 疫原性,导致不良的毒性或免疫反应而危及产品安全和质量,造成潜在的生物污染,生物医 药产品生产下游过程的目的之一就是移除这些潜在危害。 因此,非常有必要将宿主细胞蛋白(HCP)残留量降低到最di水平,在研发下游纯化的 工艺时,必须具有一种科学合理的测定成品或者半成品中 HCP 浓度的方法,而酶联免疫法具 有高灵敏度,因而被监管机构定为 HCP 检测的准。
二、实验原理
本试剂盒采用了固相夹心法的酶联免疫吸附实验(ELISA)。先将捕获抗体包被微孔板, 制成固相抗体。检测时在包被抗体的微孔板中先加入待测抗原孵育,洗涤后加入辣根过氧化 物酶(HRP)标记的检测抗体,形成包被抗体-抗原-检测抗体复合物。经洗涤后去除未参与反 应的结合物,加入底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 的氧化作用下转化成蓝色,并在酸的作 用下转化成最终的黄色。氧化后的 TMB 颜色和因子的总含量呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值),与浓度拟合成标准曲线,通过样本 OD 值,代入标准曲线方程, 计算样品中因子浓度。
三、实验需要但试剂盒未提供的材料
1) 10-1000µL 移液器及一次性灭菌吸头
2) 多道移液器
3) 灭菌的去离子水或超纯水 1L
4) 灭菌 EP 管
5) 吸水纸
6) 酶标仪
7) 高速离心机
8) 迷你离心机
9) 洗板机或者洗瓶
10) 数据分析及绘图软件
四、样本收集
培养基上清液:1000×g(或 3000rpm)离心 15 分钟,取上清,-20℃或-80℃分装保存备用。
样本准备注意事项:
样本收集完毕后,要分装保存在-20℃(少于 3 个月) 或-80℃(少于 6 个月)以保持蛋白活性 和避免污染。避免反复冻融,如果要在 24 小时内分析样本,可以保存在 2- 8℃。
某些化学裂解液可能会对本实验造成干扰,比如 SDS,Triton,谨慎使用。
样本液中含有沉淀物会对 ELISA 有干扰,务必离心去除。
不能加热来融化样本。
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