产品简介
发根农杆菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)农杆菌属(agrobacterium)的一种革兰氏阴性土壤细菌，它能够
感染 大多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。Ar.A4 发根农杆菌菌株含有农杆碱型
Ri 质粒，具有广泛的宿主范围（玉米，烟草，胡萝卜，甘草等），同时具有卡那霉素抗性。本公
司生产的 Ar.A4 化学转化感受态细胞经特殊工艺制作，pK7WGF2 质粒（壮观霉素抗性）检测，转
化效率>105 cfu/μg DNA。
产品组成
组分
Ar.A4
电转感受态细胞
10 ×100 μL
100 ×100μL
定制
基因型：Agrobacterium rhizogenes(kanR ) Ar A4 Ri(agropine type)
存储条件
-80 ℃保存; 请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
质量控制
无外源质粒 DNA 残留
电转法转化效率≥105 cfu/μg DNA。
使用方法
1. 0.1 cm 电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上 5 分钟，待其沥干水分，正置 5 分钟，使
乙醇充分挥发，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电杯顶离冰面 0.5 cm 以方便盖上杯盖，冰
中静置 5 分钟充分降温。
2. 取-80℃保存的农杆菌感受态插入冰中 5分钟，待其融化，加入 0.01-1 μg质粒 DNA（体积不大于 6ul），
用手拨打管底混匀，立即插入冰中，用200 μl枪头将感受态-质粒混合物快速移到电击杯中，盖上杯盖，
空管保留待用。
3. 启动电转仪，设置参数：C=25 μF，PC=200 ohm，V=2400 V（此参数为 Biorad 推荐，使用者也可按
所用电转仪推荐的 protocol 操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中，加入 900 μl
无抗生素的 LB 并转移到感受态空管中，28℃振荡培养 2~3 小时。
4. 6000 rpm 离心一分钟收菌，留取 100 μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的 LB 或 YEB
平板上，倒置放于 28℃培养箱培养 2-3 天（当平板只含有 50 μg/ml kan 时，28℃培养 48 h 即可；平板中
同时加入 50 μg/ml kan，20 μg/ml rif 时，需 28℃培养 60 h；如果使用的平板含有 50 μg/ml rif 则需要 28℃
培养 72-90 h）。
注意事项
1. 感受态细胞冰浴中解冻后应立即使用；
2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10；
3. 利福平浓度不应高于 25ug/ul，过高的利福平浓度不利于农杆菌生长，会降低其生长速度和转化效率。
4. Ar.A4 具有卡那霉素抗性，不可用于具有卡那霉素抗性质粒的转化。
