产品简介
发根农杆菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)农杆菌属(agrobacterium)的一种革兰氏阴性土壤细菌，它能够感染大多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。K599 发根农杆菌（NCPPB2659）含有 pRi2659 农杆碱型 Ri 质粒，具有广泛的宿主范围（葫芦科，豆科，茄科等），同时具有链霉素抗性。本公司生产的 K599 化学转化感受态细胞经特殊工艺制作，pCAMBIA2301质粒（卡那霉素抗性）检测，转化效率>105 cfu/μg DNA。
产品组成
组分
K599
电转感受态细胞
10 ×50 μL
100 ×50μL
定制
基因型：Agrobacterium rhizogenes (StrR ) pRi2659 (agropine type)
存储条件
-80 ℃保存; 请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
质量控制
除农杆碱型 Ri 质粒 pRi2659 外，无外源质粒 DNA 残留
电转法转化效率≥105 cfu/μg DNA。
使用方法
1. 将新的 2 mm 电击杯插入冰中预冷；或者将储存于 75%乙醇中的 2 mm 电击杯和杯盖取出，在超净工作台中将其倒置于干净的吸水纸上，使乙醇充分挥发，然后插入冰中预冷；
2. 取-80℃保存的农杆菌感受态插入冰中待其融化，加入 0.01-1μg 质粒 DNA（体积不大于 5μl），用200μl 枪头将感受态-质粒混合物快速转移到预冷的电击杯中，盖上杯盖；
3. 开启电转仪，设置参数（2500V ，200Ω，25μF），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成后快速插入冰中，加入 900μl 无抗生素的 YEB 并将感受态细胞转移到无菌空管中，28 ℃振荡培养 2~3 小时。
（注：此电转化参数为 Bio-rad 推荐，使用者也可使用电转仪所推荐的 Protocol 进行操作）
4. 6000 rpm 离心一分钟收菌，留取 100μl 左右上清将菌体轻轻吹匀，并涂布于含相应抗生素的 YEB 平板 上，倒置放于 28℃培养箱培养 2~3 天。
注意事项
1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的 1/10；
2. 电转感受态细胞中不可混入气泡，转化高浓度的质粒可相应减少终用于涂板的菌量；
3. 平板上阳性克隆密度不宜过大，为了获得大的菌落，应减少质粒用量或终用于涂板的菌量；
4. K599 具有链霉素抗性，不可用于具有链霉素抗性质粒的转化。
