产品描述
BL21是早开发的用于原核表达的菌株，BL21(DE3)、Rosetta、OrigamiB(DE3) 等一系列原核表达菌株均来源于BL21菌株。该菌株主要用于非毒性蛋白的表达，不含T7 RNA聚合酶，所以不能用于由T7启动子驱动的蛋白表达(如：pET系列)；但含有大肠杆菌RNA聚合酶，适合依赖于大肠杆菌RNA聚合酶的原核系统的表达(如：pGEX，pMAL质粒)。其中ompT可减少外膜蛋白酶的表达量，从而减少重组蛋白的水解，提高表达产量；hsd基因变异可致菌株细胞内的I型限制酶EcoK或EcoB活性缺失，从而提高PCR产物的转化效率。BL21感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率达107 cfu/μg DNA。
产品优势
✽ 高转化效率：>1x107 cfu/µg pUC19 DNA
✽ 适合依赖于大肠杆菌RNA聚合酶的原核系统的表达
产品组分
组分 | CC96194-01 | CC96194-02 |
BL21感受态细胞 | 10 × 100 μL | 100 × 100 μL |
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基因型：E. coli B F- dcm ompT hsdS(rB- mB-) gal [malB+]K-12(λS)
产品应用
BL21感受态细胞适用于依赖于大肠杆菌RNA聚合酶的原核系统的表达(如：pGEX，pMAL质粒)。
实验流程
1. 解冻感受态细胞：从-80 ℃取感受态细胞，放置在冰浴或冰水浴中融化，约5-10 min，放置时间过长会影响转化效率。
2. DNA样品的转化：每100 μL感受态加入待转化DNA样品(例如质粒、连接产物或重组产物等)约10 μL，然后轻轻弹击管底约2-3次，立即冰上静置孵育30 min。
✽ 加入待转化DNA样品体积通常不宜超过感受态细胞体积的10%。
✽ 加入待转化DNA样品后应轻柔操作，避免使用移液枪吹打混匀。
✽ 如果用于质粒的转化扩增，冰浴静置约10 min后可以直接涂板并培养过夜；如果用于连接产物或重组产物的转化，建议冰浴静置30分钟并严格执行后续的热激处理和复苏培养等步骤，以提高转化效率。
3. 热激处理：将冰浴后的离心管快速置于42℃水浴中，静置热激90 s。随后立即转移至冰水浴中静置2-3 min以快速冷却。
✽ 热激及转移至冰浴过程中请勿晃动离心管。
4. 复苏培养：加入900 μL 37℃预热的LB或SOC培养基，颠倒数次混匀，37℃摇床约220 rpm复苏培养45 min。
5. 收菌涂板：如果用于质粒的转化扩增，建议直接取50-100 μL进行涂板即可；如果用于连接产物或重组产物的转化，建议先5000 g，1 min室温离心沉淀细菌，吸除约900-950 μL上清，然后用剩余的约50-100 μL菌液重悬，涂布到含相应抗生素的LB平板上。
6. 过夜培养：将平板倒置放于37℃培养箱培养过夜。
✽ 培养需要将平板在超净台中稍微晾至无明显水渍，有利于形成单克隆。
保存条件
-80℃保存；请勿将本品置于-20℃或者液氮中保存。
相关参数
感受态类型 | 化学感受态 |
感受态菌株名称 | BL21 |
种属 | 大肠杆菌 |
转化效率 | 高效率 (>1x10^7 cfu/µg pUC19 DNA) |
菌株用途 | 表达 |
应用特征 | 适用于依赖于大肠杆菌RNA聚合酶的原核系统的表达 |
是否可进行蓝白斑筛选 | 否 |
菌株抗性 | - |
培养基 | LB |
培养条件 | 37℃，有氧 |
诱导方法 | - |
保存条件 | -80℃ |
运输条件 | 干冰 |
包装规格 | 管装 (100 µL/管) |
