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副溶血弧菌tdh/tlh/trh三重探针法荧光定量PCR试剂盒

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品牌名称：通蔚生物型号：原产地：中国大陆更新时间：2026/10/20 9:24:28

产品摘要：副溶血弧菌tdh/tlh/trh三重探针法荧光定量PCR试剂盒属于弧菌科弧菌属，为革兰氏阴性菌，是一种嗜盐性细菌，广泛存在于海水、海底沉积物、海产动物（如鱼、虾、蟹、贝、海蜇等的体表或者肠道内）和盐分含量较高的腌制食品中（如咸菜、腌鱼等）。

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详细内容

副溶血弧菌tdh/tlh/trh三重探针法荧光定量PCR试剂盒
产品特点
副溶血弧菌tdh/tlh/trh三重探针法荧光定量PCR试剂盒属于弧菌科弧菌属，为革兰氏阴性菌，是一种嗜盐性细菌，广泛存在于海水、海底沉积物、海产动物（如鱼、虾、蟹、贝、海蜇等的体表或者肠道内）和盐分含量较高的腌制食品中（如咸菜、腌鱼等）。通过食用这些海鲜动物，副溶血弧菌可以进入食用者的体内，可引发急性肠胃炎、伤口感染和败血症，甚至导致感染者死亡。副溶血弧菌的主要致病因子是耐热直接溶血素(Thermostable Direct Hemolysin，TDH)、不耐热溶血素(Thermolabile Hemolisin，TLH)和耐热直接溶血素相关溶血素(Thermostable Direct Hemolysin-related Hemolysin，TRH)，分别由tdh、tlh和trh基因编码，因此，同时tdh、tlh和trh基因具有重要意义。本产品就是以探针法qPCR技术为基础开发的相关试剂盒，它具有下列特点：

1. 即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。

2. 引物和探针经过优化，分析灵敏性高，可以达到100拷贝/反应。

3. 提供阳性对照，便于排除假阴性结果。

4. 特异性高，引物和探针分别根据副溶血弧菌tdh、tlh和trh基因高度保守区设计，不会跟其他生物的DNA或副溶血弧菌的其他基因发生交叉反应。

5. 本产品只用于定性检测，不推荐用于定量检测。

6. tdh、tlh和trh基因分别用FAM、HEX和ROX标记的三个探针检测。

7. 本产品足够50次20µL体系的探针法qPCR反应。

8. 本产品只能用于科研。

参数规格

成分	规格	包装
2×Probe qPCR MasterMix	500µL	0.5mL红盖管
荧光PCR专用模板稀释液	1mL	1.5mL绿盖管
副溶血弧菌tdh、tlh和trh基因三重PCR引物-探针干粉	50次	0.5mL棕色管
副溶血弧菌tdh基因阳性对照（1×10E4拷贝/µL）	50µL	0.5mL白色管
副溶血弧菌trh基因阳性对照（1×10E4拷贝/µL）	50µL	0.5mL黄盖管
使用手册	1份	无
本产品采用十孔盒包装
注意：在使用前需要短暂离心引物-探针干粉管，然后在离心管中加入165 µL的超纯水充分混匀后再使用，未用完的需要-20℃保存。

使用方法

一、样品DNA的制备

1. 如果有N个样品，最好设置N+2个提取，多出的一个是样本制备PC（阳性对照），一个是样本制备NC（阴性对照）。可以用自备的、确定三个基因为阳性的样本作为样品制备PC。可以用自备的、确定是阴性的样本作为样品制备NC，可以用水替代。

2. 用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数DNA提取试剂盒兼容。

副溶血弧菌tdh/tlh/trh三重探针法荧光定量PCR试剂盒
二、Probe PCR反应（20µL体系，在样品制备室进行）

3. 如果有N+2个核酸提取，则设置N+6个PCR反应，多出的4个1个用于PCR NC，另外三个分别用于三个待检测基因的PCR PC。在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复）：

成分	样品管 N+2个	PCR NC	tdhPC	tlhPC	trhPC
2×Probe qPCR MasterMix	各10µL	10µL	10µL	10µL	10µL
副溶血弧菌tdh、tlh和trh基因三重PCR引物-探针溶液	各3µL	3µL	3µL	3µL	3µL
N+2个待测DNA样本	各7µL	不加	不加	不加	不加
副溶血弧菌tdh基因阳性对照（1×10E4拷贝/µL）	不加	不加	不加	不加	不加
副溶血弧菌tlh基因阳性对照（1×10E4拷贝/µL）	不加	不加	7µL	不加	不加
副溶血弧菌trh基因阳性对照（1×10E4拷贝/µL）	不加	不加	不加	不加	7µL

4.盖上盖子后上机，按下面参数进行PCR：

过程	温度	时间
预变性	95℃	10min
PCR反应（45个循环）	94℃	15sec
PCR反应（45个循环）	60℃	60 sec（采集FAM通道、HEX通道和ROX通道的荧光信号，淬灭基团均为TAMRA）

副溶血弧菌tdh/tlh/trh三重探针法荧光定量PCR试剂盒
三、数据处理

5. 实验有效性分析：

PC：所有PC反应应该在对应的通道呈现阳性，如tdh PC应该为FAM通道阳性，tlh PC应该为HEX通道阳性。如果样本制备PC在其对应的通道为阴性，则整个样本制备实验无效。如果三个基因的PCR PC在其对应的通道为阴性（如tlh PC为HEX通道阴性），则整个PCR扩增实验无效。样本制备无效和扩增实验无效时均不需要分析数据，需要找到原因后再进行后续实验，可能原因包括操作失误、试剂变质或仪器故障。NC：样本制备NC和PCR NC应该在所有通道呈阴性。如果样本制备NC或PCR NC结果在任何通道为阳性，则整个样本制备和PCR扩增实验无效，不需要分析数据，需要找到原因后再进行后续实验。可能原因是环境污染。

如果PC和NC均正常，则实验有效，可以对待测样本结果进行分析。

6. 样本结果分析：如果FAM通道、HEX通道和ROX通道的Ct大于或等于40，或者没有Ct值，则判为阴性。如果Ct小于40，并且荧光信号呈现倒S的典型扩增曲线，则判断为该通道对应的基因阳性。FAM通道阳性则表示含有tdh基因，HEX通道阳性则表示含有tlh基因，ROX通道阳性则表示含有trh基因。

自备试剂
样品DNA

运输及保存
低温运输，-20℃保存，有效期1年

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