注意事项:
1. 收到Sars结构蛋白表达株;293 001B说明书后,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们。
2. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
细胞名称 Sars结构蛋白表达株;293 001B说明书
形态特性 上皮样
生长特性 贴壁生长
特征特性 表达Sars结构蛋白
培养条件 IMDM: Iscove's Modiefied Dulbecco's Medium 10%FBS;500ug/ml IL-2
传代方法 1:6传代;2~3天1次
传代情况 P10
冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS
【培养指南】
Sars结构蛋白表达株;293 001B说明书对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
【细胞冻存】
Sars结构蛋白表达株;293 001B说明书待细胞生长状态良好时,可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。
【复苏的原则】
Sars结构蛋白表达株;293 001B说明书快速融化:必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货,全国统一价格,本公司出售的所有细胞仅供科研使用。
细胞培养的优点:1.Sars结构蛋白表达株;293 001B说明书研究的对象是活细胞
在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种
仪器设备。

实验报告:
一、Sars结构蛋白表达株;293 001B说明书分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗(Abbioscience公司),然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗(嘉美生物公司), 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜(Leica公司)下观察图像并拍照。
L-还原型谷胱甘肽,英文名或英文缩写:GSH,级别:BR,99%,规格:1克
6290-49-9甲氧基乙酸甲酯metxyl metxoxyacetate;
N-Fmoc-L-AsparagineN-芴甲氧羰基-L-天冬酸100克特纯,98%
3-录-2-基炳烯;γ-录异丁烯;代烯炳基录;异丁烯基录 3-Chloro-2-Mqthylpropqnq;β-Mqthcllyl chloridq;Isobutqnyl chloridq;3-Chloro-2-Mqthyl-1-propqnq 263-47-3
MMA甲基败脂酸甲酯100克CP,98%
多聚赖酸/多聚-L-赖酸/聚-L-赖酸盐/多聚赖酸盐/Poly-L-lysine hydrobromide 分子量3~7万 25毫克 国产/进口
TERRIFICBROTH,POWDER极品肉汤, 粉末生物技术级5 KGRT
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木防己苦读速(剧读) 14-87-8
氧化锗/二氧化锗/Germanium dioxide 5N, 5克 国产/进口
福林酚25毫克2~8℃
碳分子筛 TDX-01Carbon molecular sieve TDX-01
四溴酚兰100克
2-三 2-Chlorobenzotrifluoride,99% 88-16-4 100G 通用试剂
镓/金属镓/Gallium 5N, 10克 国产
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甘露醇发酵培养基 250(g) incubation media 甘露醇发酵培养基 250(g)
科玛嘉李斯特氏菌显色培养基 1000ml/瓶
其它菌检测培养基incubationmedia其它菌检测培养基
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Sars结构蛋白表达株;293 001B说明书麦康凯琼脂(不含盐)250g用于肠道致病菌的选择性分离、培养(OXOID方法)
Mannitol salt phenol-red agar甘露醇盐酚红琼脂 1.05404.0500 MERCK默克 incubation media Mannitol salt phenol-red agar甘露醇盐酚红琼脂 1.05404.0500 MERCK默克
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骨髓间质干细胞完全培养基Adultbonemarrowmesenchymalstemcellstocompletemedium
FuchsinBasicSodiumSulfiteAgar