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5×双色蛋白上样缓冲液(还原)
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详细内容
本制品是5倍浓缩的SDS-PAGE凝胶电泳上样缓冲液,应用于还原型SDS-PAGE的蛋白样品制备和上样。该缓冲液中含有两种示踪染料:溴酚蓝和吡啰红Y,可以指示SDS-PAGE电泳过程以及Weastern blot的转膜效率。该缓冲液已经加入DTT,可使蛋白质分子的链内二硫键和链间二硫键断裂,经考马斯亮蓝染色以后在电泳凝胶上显现清晰蛋白条带。

| 产品名称 | 英文名称 | 规格 |
| 5×双色蛋白上样缓冲液(还原) | 5×DualColor Protein loading buffer (reducing) | 10mL |
保存:-20℃。
操作步骤:
融化-混合-变性-上样
将5×双色蛋白上样缓冲液37℃数分钟解冻后轻轻摇匀,以确保溶液混合均匀。
将缓冲液与蛋白样品按照1:4的比例混匀。
将蛋白样品置于95℃中加热5分钟。
待蛋白样品充分变性后冷却至室温,快甩离心收集到管底,直接加入SDS-PAGE凝胶加样孔内电泳。
注意事项:
由于含有DTT,该缓冲液不适合于Native SDS-PAGE电泳。非变性电泳请选择4×Native-PAGE protein loading buffer
一般说来,电泳中吡啰红Y泳动速度快于溴酚蓝,但在高浓度SDS-PAGE胶中(高于15%分离胶),吡啰红Y泳动速度慢于溴酚蓝。
产品仅用于科研操作程序:
注意:重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗*:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
Dregeoside Aa1 20230-41-5 中文名: 分子式:C49H78O17 兔子基质金属蛋白酶4(MMP-4)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
Tigogenin 77-60-1 中文名:剑麻皂素 分子式:C27H44O3 Human thymidine phosphorylase (TP) ELISA Kit 人胸腺嘧啶核苷0酸化酶(TP)ELISA试剂盒
Adynerigenin β-neritrioside 88721-09-9 中文名: 分子式:C42H64O17 HumanAi-glucoprotein210,GP210ELISAKit 人抗核膜糖蛋白210抗体(gp210)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
Tenacissoside G 191729-43-8 中文名:通关藤苷G 分子式:C42H64O14 Humaneosinophilcationicprotein,ECPELISA试剂盒人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(ECP)ELISA试剂盒规格:96T/48T
Dehydroadynerigenin β-neritrioside 143212-60-6 中文名: 分子式:C42H62O17 组织PKCι激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次
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亚甲基二水杨酸(异构体的混合物)(>90.0%(T)) Methylenedisalicylic Acid (mixture of isomers) 质量规格:>90.0%(T) 大鼠尿苷二0酸葡萄糖酸转移酶2(UGT2)试剂盒 Rat UDP-glucumno-sylansferase 2,UGT2 ELISA Kit
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4-烯丙氧基-2-羟基二苯甲酮(>97.0%(HPLC)(T)) 4-Allyloxy-2-hydroxybenzophe (HPLC)(T) 酵母菌DOB培养基100毫升
3,3',4,4'-二苯酮四羧酸二酐(>96.0%(T)) 3,3',4,4'-Benzophetetracarboxylic Dianhydride (T) ELISAKitGP-MM人糖原0酸化酶同工酶MM规格:48T/96T
4-苯甲酰-4'-甲基二苯硫醚(>98.0%(GC)) 4-Benzoyl 4'-Methyldiphenyl Sulfide 小鼠蛋白酪酸0酸酶受体H(PTPRH)ELISA试剂盒 ,英文名: PTPRH ELISA Kit
4,4'-双(甲氨基)二苯甲酮(>98.0%(T)) 4,4'-Bis(methylamino)benzophe 质量规格:>98.0%(T) 人视黄醇结合蛋白4(RBP-4)ELISA检测试剂盒Humaetinolbindingprotein4,RBP-4ELISAKit 96T/48T
2,4'-二氯二苯甲酮(>99.0%(GC)) 2,4'-Dichlorobenzophe 大鼠尿苷二0酸葡萄糖酸转移酶1(UGT1)试剂盒 Rat UDP-glucumno-sylansferase 1,UGT1 ELISA Kit
2,2'-二羟基-4,4'-二甲氧基二苯甲酮(>90.0%(GC)) 2,2'-Dihydroxy-4,4'-dimethoxybenzophe 质量规格:>90.0%(GC) 英文名称RatMaixmetalloproteinase-8—MMP-8ELISAkit大鼠基质金属蛋白酶8(MMP-8)规格:96T/48T
4,4'-二羟基二苯甲酮(>98.0%(GC)(T)) 4,4'-Dihydroxybenzophe 质量规格:>98.0%(GC)(T) 酵母菌SD-ADE培养基100毫升
5×双色蛋白上样缓冲液(还原)Alpha软脂酸香树精酯 HPLC≥98% 20mg MouseFolicacid,FAELISAKit小鼠叶酸(FA)ELISA试剂盒规格:96T/48T
Alvocidib HPLC≥98% 20mg MouseFolicacid,FAELISA试剂盒小鼠叶酸(FA)ELISA试剂盒规格:96T/48T
Bevirimat HPLC≥98% 20mg mousefollicle-stimulatinghormone,FSHELISA试剂盒小鼠促卵泡素(FSH)ELISA试剂盒规格:96T/48T
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Celgosivir HPLC≥98% 20mg Mousefractalkine/CX3CL1ELISAKit小鼠趋化因子(fractalkine/CX3CL1)ELISA试剂盒规格:96T/48T
Cimiracemoside D HPLC≥98% 20mg Mousefractalkine/CX3CL1ELISA试剂盒小鼠趋化因子(fractalkine/CX3CL1)ELISA试剂盒规格:96T/48T
cis紫茎女贞苷B HPLC≥98% 10mg Mousefreefattyacids,FFAELISAKit小鼠游离脂肪酸(FFA)ELISA试剂盒规格:96T/48T
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D(+)木糖 HPLC≥99% 20mg MouseFreei-iodothyronineIndes,Free-T3ELISAKit小鼠游离三甲状腺原氨酸(Free-T3)ELISA试剂盒规格:96T/48T
D(+)苹果酸 HPLC≥90% 20mg MouseFreei-iodothyronineIndes,Free-T3ELISA试剂盒小鼠游离三甲状腺原氨酸(Free-T3)ELISA试剂盒规格:96T/48T
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