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详细内容
?本试剂盒能够快速,温和,高效的裂解哺乳动物细胞,有效提取细胞浆和细胞核蛋白。该试剂使用温和配方保证所提取蛋白保持生物学活性并可应用于多种蛋白分析试验,如:报告基因和酶活性测定,免疫检测,蛋白纯化等。提取后蛋白可采用BCA法进行蛋白定量分析。哺乳动物蛋白抽提试剂盒中带有蛋白酶抑制剂混合物,可有效避免蛋白提取过程中蛋白的降解。
| 产品名称 | 英文名称 | 规格 |
| 哺乳动物蛋白抽提试剂盒 | Mammalian Protein Extraction Kit | 25次|100次 |
保存条件:Protease Inhibitor Cocktail:-20℃,其它组分:室温

注意事项:
1、本产品可有效裂解细胞培养板培养的贴壁细胞(无需刮取)以及离心收集的悬浮细胞,较反复冻融或超声法具有更高提取效率。但对于组织蛋白的抽提,建议使用组织蛋白抽提试剂盒(WE0260)。
2、表1中所列的是贴壁细胞蛋白提取的佳使用量,先收集细胞可以减少试剂用量从而获得更高的蛋白浓度。
3、也可以根据细胞数量估计抽提试剂的使用量。如2×106个Hela细胞约重20 mg,需要加入200μl抽提试剂。
4、通过本产品提取的蛋白,可通过BCA法进行蛋白定量分析。
盐酸阿莫罗芬/盐酸阿莫洛芬 (标准品) Amorolfine 质量规格:HPLC>98%,标准品 冰冻切片组织RHO蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20
氨苄西林钠/氨苄青霉素钠 Ampicillin 质量规格:>900μg/mg, USP,BR 冰冻切片组织RUNX3蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20
氨苄西林钠(标准品) Ampicillin 质量规格:标准品用于含量测定 冰冻切片组织RyR受体蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20
扁桃苷/苦杏仁苷 Amygdalin 质量规格:>98%,BR 冰冻切片组织TNFALPHA蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20
扁桃苷/苦杏仁苷(标准品) Amygdalin 质量规格:HPLC≥98%,标准品 冰冻切片组织TNFBETA蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20
阿尼芬净 Anidulafungin 质量规格:>98%,BR 冰冻切片组织TSH-BETA蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20
安丝菌素P-3(束丝放线菌) Ansamitocin P-3 质量规格:总含量>95% ,进分 冰冻切片组织TUBULIN蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20
阿瑞吡坦;阿瑞匹坦 Aprepitant 质量规格:>98%;NK1受体拮抗剂 冰冻切片组织VEGF蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20
泰诺福韦;替诺福韦 Tenofovir 质量规格:>98%,BR 冰冻切片组织αSMA蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20
泰诺福韦;替诺福韦(标准品) Tenofovir 质量规格:HPLC≥99%,标准品 冰冻切片组织βAMYLOID蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20
冰冻切片组织PP2A蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20 盐酸阿莫罗芬/盐酸阿莫洛芬 Amorolfine 质量规格:≥99,BR
冰冻切片组织RHO蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20 盐酸阿莫罗芬/盐酸阿莫洛芬 (标准品) Amorolfine 质量规格:HPLC>98%,标准品
冰冻切片组织RUNX3蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20 氨苄西林钠/氨苄青霉素钠 Ampicillin 质量规格:>900μg/mg, USP,BR
冰冻切片组织RyR受体蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20 氨苄西林钠(标准品) Ampicillin 质量规格:标准品用于含量测定
冰冻切片组织TNFALPHA蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20 扁桃苷/苦杏仁苷 Amygdalin 质量规格:>98%,BR
冰冻切片组织TNFBETA蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20 扁桃苷/苦杏仁苷(标准品) Amygdalin 质量规格:HPLC≥98%,标准品
冰冻切片组织TSH-BETA蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20 阿尼芬净 Anidulafungin 质量规格:>98%,BR
冰冻切片组织TUBULIN蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20 安丝菌素P-3(束丝放线菌) Ansamitocin P-3 质量规格:总含量>95% ,进分
冰冻切片组织VEGF蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20 阿瑞吡坦;阿瑞匹坦 Aprepitant 质量规格:>98%;NK1受体拮抗剂
冰冻切片组织αSMA蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒10/20 泰诺福韦;替诺福韦 Tenofovir 质量规格:>98%,BR
哺乳动物蛋白抽提试剂盒大量植物组织叶绿体DNA萃取试剂盒5(20克/) 樱草素 HPLC≥98% 20mg
Ratkeratinocyteaocrinefactor/Amphiregulin,KAF/ARELISA试剂盒大鼠角化细胞因子(KAF)/双调蛋白(AR)ELISA试剂盒规格:96T/48T 鹰嘴豆芽素A HPLC≥98% 20mg
小鼠胰岛素受体底物1(IRS1)ELISA试剂盒 ,英文名: IRS1 ELISA Kit 硬飞燕草碱 HPLC≥98% 20mg
兔子白血病抑制因子受体(LIFR)ELISA检测试剂盒rabbitleukemiainhibitoryfactorreceptor,LIFRELISAKit 96T/48T 硬脂酸甲酯 GC≥98% 50mg
犬促肾上皮质激素释放激素(CRH)试剂盒 Dog coicoopin releasing hormone,CRH ELISA Kit 油酸 鉴别 0.1ml
英文名称HumanDHEAELISAKit人脱氢表雄同(DHEA)规格:96T/48T 油酸甲酯 GC≥98% 100mg
大量植物组织叶绿体DNA萃取试剂盒5(20克/) 柚皮苷 HPLC≥98% 20mg
RatKidneyinjurymolecule1,Kim-1ELISA试剂盒大鼠肾损伤分子1(Kim-1)ELISA试剂盒规格:96T/48T 柚皮苷二氢查尔酮 HPLC≥98% 20mg
小鼠胰岛素受体β(ISR-β)ELISA试剂盒 ,英文名: ISR-β ELISA Kit 柚皮素 HPLC≥98% 20mg
小鼠抗胰蛋白酶(AT)ELISA检测试剂盒MouseAi-ypsin,ATELISAKit 96T/48T 柚皮素O葡萄糖醛酸苷 HPLC≥98% 10mg
产品仅用于科研操作程序:
注意:重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗*:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
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