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详细内容
本试剂盒是基于HiperClone快速克隆技术的定点突变系统。使用本试剂盒,目标质粒扩增产物经DpnI消化、HiperClone重组环化后直接进行转化即可完成定点突变。

| 产品名称 | 英文名称 | 规格 |
| 定点突变试剂盒 | HiperMut Site-Directed Mutagenesis Kit | 10T |
本试剂盒由两个模块组成:Hiper II Pfu DNA聚合酶扩增模块和HiperClone快速克隆模块。Hiper II Pfu DNA聚合酶超高的保真度显著降低了扩增过程中引入新突变的可能性,其卓越的长片段扩增能力,广泛适用于长度小于20kb的任何质粒扩增。HiperClone快速克隆系统利用高效的同源重组反应替代传统的退火成环反应。因此使用HiperMut定点突变试剂盒进行DNA定点突变时,引物设计更加灵活,且扩增反应不再需要以线性方式进行,大减少了模板使用量,有利于原始甲基化模板的彻底降解。HiperClone技术可以高效完成两个PCR产物的无缝拼接,因此该试剂盒还能以单次扩增的方式对目标质粒上不连续的两个位点同时进行突变。
本试剂盒中的重组酶Exnase经过优化,门针对单碱基、不连续双碱基定点突变。此外,如扩增产物特异,其DpnI消化产物可不进行DNA纯化而直接用于重组反应。高度优化的反应缓冲液、快捷的操作流程以及高的成功率,使得本试剂盒成为DNA定点突变选产品。
保存:-20℃,有效期1年。
产品仅用于科研操作程序:
注意:重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗*:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
O没食子酰岩白菜素 HPLC≥98% 5mg 200微升1厘米光径石英比色皿1个
羟基松香酸 HPLC≥98% 5mg MouseCyclin-D1ELISA试剂盒小鼠细胞周期素D1(Cyclin-D1)ELISA试剂盒规格:96T/48T
乙酰氧基松香酸 HPLC≥98% 5mg 小鼠小扁结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体2(AFP-L2)ELISA试剂盒 ,英文名: AFP-L2 ELISA Kit
()齐墩果烯醇 HPLC≥98% 5mg 小鼠载脂蛋白H(Apo-H)ELISA检测试剂盒MouseApolipoproteinH,Apo-HELISAKit 96T/48T
O乙酰基马桑宁 HPLC≥98% 5mg 人琥珀酰辅酶A合成酶(SCS)试剂盒 Human succinyl coenzyme A syhetase,SCS ELISA kit
邻去乙酰基红豆杉醇 Z HPLC≥98% 5mg RatCross-linkedCarboxy-terminaltelopeptideoftypeⅠcollagen,ⅠCTPELISAKit大鼠Ⅰ型胶原交联羧基末端肽(ⅠCTP)ELISA试剂盒规格:96T/48T
羟基,,罗汉松科三烯酸 HPLC≥98% 5mg 200微升1厘米光径塑料比色皿1个
去氧,二去氢穿心莲内酯 HPLC≥98% 5mg MouseCyclin-D2ELISA试剂盒小鼠细胞周期素D2(Cyclin-D2)ELISA试剂盒规格:96T/48T
甲氧基松柏酸 HPLC≥98% 5mg 小鼠小扁结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体1(AFP-L1)ELISA试剂盒 ,英文名: AFP-L1 ELISA Kit
脱氧尤可甾醇 HPLC≥98% 5mg 小鼠氧化酶(DAO)ELISA检测试剂盒Mousediamineoxidase,DAOELISAKit 96T/48T
人细胞程序性死亡蛋白1(PDCD1)酶联免疫吸附测定试剂盒 别称:CD279, PD1, PD-1, SLEB2 Human PD-1(Programmed Cell Death Protein 1) ELISA Kit 用途 该试剂盒用于体外定量检测Human 血清,血浆或其他生物体液中天然及部分重组PD-1浓度
定点突变试剂盒人白介素1受体Ⅱ(IL-1R2)酶联免疫吸附测定试剂盒 别称:IL1R2, CD121b, CDw121b, IL-1R-2, IL-1RT-2, IL-1RT2, IL1R2c, IL1RB Human IL-1R2(Interleukin 1 Receptor Type Ⅱ) ELISA Kit 用途 该试剂盒用于体外定量检测Human 血清,血浆或其他生物体液中天然及部分重组IL-1R2浓度
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