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裂殖酵母化学感受态细胞制备试剂盒
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详细内容
本裂殖酵母化学感受态细胞制备试剂是一种通过化学处理,高效快速制备裂殖酵母化学感受态细胞,用于长期冻存以备后续转化的产品。
| 产品名称 | 英文名称 | 规格 |
| 裂殖酵母化学感受态细胞制备试剂盒 | S.pombe Chemical Competent Cell Preparation Kit | 20次 |

产品特点:
1.一次制备,-80℃保存,多次使用,免去每次转化都要制备裂殖酵母感受态细胞。
2.操作简单,单溶液制备,除酵母培养的时间外,整个操作只需要30分钟。
3.主要用于裂殖酵母S.pombe,其他多种实验用酵母菌株好选用酵母化学感受态细胞制备试剂(BTN81109)。
4.受体酵母可以不含质粒,也可用于携带有选择性质粒的酵母(如双杂交体系中的酵母)。
5.高转化效率可达到0.2-1×105个转化子/μg质粒DNA。
6.得到的感受态细胞可以用各种线性或环状酵母穿梭质粒DNA进行转化,例如YIp,YRp,YCp,YEp和YAC等。
7.可以用于酵母双杂交、定点突变、基因破坏、等位突变基因修复等实验。
8.本产品可以制备20只裂殖酵母感受态细胞(需要100mL裂殖酵母培养液),其中A型只用于制备感受态细胞,B型还带高效转化液。
储存条件:常温运输及保存,有效期一年。
使用效果:
将一个酵母菌落接种到SLD培养基中,30℃摇晃培养直到OD600达到0.6-1.0,冰浴15分钟后离心弃上清,用自备无菌水洗涤三次,然后用相当于菌液初体积百分之一的溶液A重悬,按每管50μl分装,放-80℃保存。
远志皂苷元 HPLC≥98% 20mg 人甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP)试剂盒 Human Parathyroid Hormone Related Protein,PTHrP ELISA Kit
月桂氮卓酮 GC≥98% 0.1ml RatBeta-Endorphieceptor,β-EPRELISAKit大鼠β内啡肽受体(β-EPR)ELISA试剂盒规格:96T/48T
月桂烯(香叶烯) GC≥80% (HPLC≥95%) 0.5mL 石蜡切片软骨组织染色试剂盒50
芸苔素内酯 HPLC≥95% 20mg MouseAquaporin1,AQP-1ELISA试剂盒小鼠水通道蛋白1(AQP-1)ELISA试剂盒规格:96T/48T
芸香柚皮苷 HPLC≥98% 20mg 小鼠胰蛋白酶1(ypsin-1)ELISA试剂盒 ,英文名: ypsin-1 ELISA Kit
孕甾烯醇酮; HPLC≥98% 20mg 小鼠铁蛋白(FE)ELISA检测试剂盒Mouseferritin,FEELISAKit 96T/48T
皂皮酸 HPLC≥98% 20mg 人甲状旁腺激素1受体(PTH1R)试剂盒 Human Parathyroid Pormone 1 Receptor,PTH1R ELISA Kit
泽兰黄酮 HPLC≥98% 20mg RatBeta-Endorphin,β-EPELISAKit大鼠β内啡肽(β-EP)ELISA试剂盒规格:96T/48T
泽泻醇A HPLC≥98% 20mg [35S]-Cys细胞代谢标记试剂盒20
泽泻醇A醋酸酯; HPLC≥98% 20mg MouseAquaporin2,AQP-2ELISA试剂盒小鼠水通道蛋白2(AQP-2)ELISA试剂盒规格:96T/48T
人基质金属蛋白酶抑制因子4(TIMP-4)酶联免疫吸附测定试剂盒 别称:TIMP4 Human TIMP-4(Tissue Inhibitors of Metalloproteinase 4) ELISA Kit 用途 该试剂盒用于体外定量检测Human 血清,血浆或其他生物体液中天然及部分重组TIMP-4浓度
裂殖酵母化学感受态细胞制备试剂盒人肝配蛋白A受体3(EPHA3)酶联免疫吸附测定试剂盒 别称:EPHA3, Epha3, AW492086, Cek4, ETK1, End3, Hek, Hek4, Mek4, Tyro4, EK4, ETK, EPH receptor A3, HEK, HEK4, TYRO4 Human EPHA3(Ephrin Type A Receptor 3) ELISA Kit 用途 该试剂盒用于体外定量检测Human 血清,血浆或其他生物体液中天然及部分重组EPHA3浓度
产品仅用于科研操作程序:
注意:重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗*:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
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