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一步法荧光定量RT-PCR试剂盒(探针法)
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/19 9:52:30
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详细内容
试剂盒是一种基于TaqMan等探针的用于一步法反转录实时荧光定量PCR，主要用于RNA的特异性超高灵敏度定量检测。由于使用的探针一般是TaqMan探针，所以本方法也常称作TaqMan探针法。
| 产品名称 | 英文名称 | 规格 |
| 一步法荧光定量RT-PCR试剂盒(探针法) | ByFast One-Step Probe qRT-PCR Kit | 20μL×100T|20μL×500T |
本试剂盒以提取的RNA为模版，使用qPCR引物在同一反应管内连续进行反转录和荧光定量PCR，操作简单快速，大限度地减少人为误差，有效降低污染风险，节约PCR实验的操作时间，检测通量大。
本试剂盒整合了高效的BalbRT M-MuLV Reverse Transcriptase、RNase Inhibitor和优异的抗体结合型热启动ByFast Taq DNA Polymerase，并优化了缓冲体系，反转录性能优、检测灵敏度高、扩增特异性强、反应稳定性好，非常适合于內源低丰度RNA、外源病毒RNA等微量RNA的检测。
检测原理：
探针法qPCR不使用荧光染料如SYBR Green等对PCR产物进行荧光染色，而是采用了荧光基团和淬灭基团(quencher)标记的DNA探针靶向拟通过PCR检测的目标序列(设计的探针结合位点通常位于两条引物结合位点之间)。正常情况下，探针上的淬灭基团由于空间上的荧光共振能力转移(FRET)而导致荧光基团淬灭。在PCR反应扩增目标序列时，引物和探针都会退火到目标基因上，随着引物的延伸，Taq酶的5＇→3＇外切酶活性会导致结合在目标序列上的探针从5’端开始逐渐被降解。探针的荧光基团和淬灭基团被Taq酶切开后，淬灭基团的作用消失，荧光基团就能正常地被激发光所激发而产生荧光了。每经过一个PCR循环，就会有更多的荧光基团被释放，荧光强度与新合成的目标片段数量成正比，从而就可以实现定量检测了。探针通常是目标序列特异性的一段线性DNA，5＇端标记FAM或HEX等荧光基团，3＇端标记BHQ1、TAMRA或MGB等荧光淬灭基团。
保存：-20℃避光，尽量避免反复冻融，有效期2年。
肉桂醛 HPLC≥98% 20mg 组蛋白H2A-T1290酸化检测试剂盒10/20等
肉桂酸 HPLC≥98% 20mg MouseAmylinELISA试剂盒小鼠胰淀素(Amylin)ELISA试剂盒规格：96T/48T
瑞枯灵 HPLC≥98% 20mg 小鼠原激活的蛋白激酶/MAP激酶(Mapk1/Erk2/Mapk/Prkm1)ELISA试剂盒 ，英文名： Mapk1/Erk2/Mapk/Prkm1 ELISA Kit
瑞香素 HPLC≥98% 20mg 小鼠可溶性白细胞分化抗原40配体(sCD40L)ELISA检测试剂盒MouseSolubleClusterofdiffereiation40ligand,sCD40LELISAKit 96T/48T
噻嗪二酮 HPLC≥98% 5mg 人谷氨酸[NMDA]受体亚基ε-2(-2)抗体试剂盒 Human -2 Aibody ELISA Kit
噻嗪二酮苷 HPLC≥98% 5mg RatGlycatedhemoglobinA1c,A1cELISAKit大鼠糖化血红蛋白A1c(A1c)ELISA试剂盒规格：96T/48T
赛门苷I HPLC≥98% 20mg ATP酶法冰冻切片动物肌肉组织分型染色试剂盒20
三白草酮 HPLC≥98% 20mg MouseHistamine,HISELISA试剂盒小鼠组胺(HIS)ELISA试剂盒规格：96T/48T
三尖杉碱 HPLC≥98% 20mg 小鼠原肌球调节蛋白3(TMOD3)ELISA试剂盒 ，英文名： TMOD3 ELISA Kit
三尖杉宁碱 HPLC≥98% 20mg 猴载脂蛋白A1(apo-A1)ELISA检测试剂盒MonkeyapoproteinA1,apo-A1ELISAKit 96T/48T
人补体成分3a(C3a)酶联免疫吸附测定试剂盒 别称:C3a-desArg, ASP Human C3a(Complement Component 3a) ELISA Kit 用途 该试剂盒用于体外定量检测Human 血清，血浆或其他生物体液中天然及部分重组C3a浓度
一步法荧光定量RT-PCR试剂盒(探针法)人C肽(C-P)酶联免疫吸附测定试剂盒 别称:Connecting Peptide Human C-P(C-Peptide) ELISA Kit 用途 该试剂盒用于体外定量检测Human 血清，血浆或其他生物体液中天然及部分重组C-P浓度
产品仅用于科研操作程序：
注意：重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20－－30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗*：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲苯透明，封片。
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