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鼠尾直接PCR扩增试剂盒
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详细内容
本试剂盒采用独特的裂解缓冲液快速裂解鼠尾,释放的DNA无需纯化便可以作为模板,用高度耐抑制物的2×DirectAmp PCR Mix扩增,扩增产物可直接上样电泳。具有简单,高通量筛选等特点,一般扩增大小<2.5kb。
| 产品名称 | 英文名称 | 规格 |
| 鼠尾直接PCR扩增试剂盒 | Mouse Tail Direct PCR Kit | 100T|500T |
适用范围:鼠尾、动物组织(哺乳动物,海洋动物,昆虫等)、细胞等。
保存条件:2×DirectAmp PCR Mix -20℃保存,避免反复冻融次数过多,3周内短时间使用可放4℃保存。其余常温或者4℃保存,有效期12个月。

操作步骤:
1.配制即用裂解液:按照10μl Buffer AD1 + 90μl ddH2O = 100μl比例混合配制成即用裂解液。每个样品需要75μl即用裂解液,具体量可以根据样品数量按照比例放大配制即可。即用裂解液可常温存放1个月。
2.取75μl裂解液于0.2mL PCR薄壁管中(没有PCR仪器者也可以用0.5ml离心管)。然后加入1-2mm的鼠尾或者2mm见方的组织(切记不可多加,多加反而抑制下游PCR),样品浸没在裂解液内。
3.98℃裂解30min(建议PCR仪上操作),根据情况裂解时间可以在10分钟-1小时内调整。
4.取出离心管迅速放冰上,加入75μl Buffer AD2,混匀,即可直接用做PCR模板或置于4℃或-20℃保存。
5.PCR扩增:
罗汉松树脂酚 HPLC≥98% 20mg 载玻片细胞β脘蛋白(PRION)蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒10/20
罗红霉素 HPLC≥98% 200mg MouseADisiegrinAndMetalloprotease8,ADAM8ELISA试剂盒小鼠解整合素样金属蛋白酶8(ADAM8)ELISA试剂盒规格:96T/48T
罗通定 HPLC≥98% 20mg 小鼠整合素α5(Itgax/CD11c)ELISA试剂盒 ,英文名: Itgax/CD11c ELISA Kit
罗希吐碱 HPLC≥98% 20mg 小鼠低密度脂蛋白复合物(LDL-IC)ELISA检测试剂盒MouseLDL-ICELISAKit 96T/48T
萝卜硫苷 HPLC≥98% 20mg 人巨噬细胞集落刺激因子受体(M-CSFR)试剂盒 Human M-CSFR ELISA Kit
萝卜硫素 HPLC≥98% 20mg Ratalpha-L-fucosidase,AFUELISAKit大鼠αL岩藻糖苷酶(AFU)ELISA试剂盒规格:96T/48T
洛伐他汀 HPLC≥98% 20mg 载玻片细胞蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒-LEPTIN10/20
络塞定 HPLC≥98% 10mg MouseADisiegrinAndMetalloprotease9,ADAM9ELISA试剂盒小鼠解整合素样金属蛋白酶9(ADAM9)ELISA试剂盒规格:96T/48T
络塞琳 HPLC≥98% 10mg 小鼠整合素α3(ITGα3)ELISA试剂盒 ,英文名: ITGα3 ELISA Kit
络塞维 HPLC≥98% 20mg 热休克蛋白糖蛋白96(HSPgp96)ELISA检测试剂盒MonkeyHeatShockProteinglycoprotein96,HSPgp96ELISAKit 96T/48T
人吻素1(KISS1)酶联免疫吸附测定试剂盒 别称:Metastin, KISS1, KiSS-1, HH13, KiSS-1 Metastasis-Suppressor Human KISS1(Kisspeptin 1) ELISA Kit 用途 该试剂盒用于体外定量检测Human 血清,血浆或其他生物体液中天然及部分重组KISS1浓度
鼠尾直接PCR扩增试剂盒人铁调素(Hepc)酶联免疫吸附测定试剂盒 别称:HAMP, Hepcidin Antimicrobial Peptide Human Hepc(Hepcidin) ELISA Kit 用途 该试剂盒用于体外定量检测Human 血清,血浆或其他生物体液中天然及部分重组Hepc浓度
产品仅用于科研操作程序:
注意:重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗*:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
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