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qPCR MasterMix(TaqMan探针法,高浓度ROX)
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详细内容
本制品是一种基于TaqMan等探针的用于实时荧光定量PCR,即探针法qPCR(Quantitative PCR)或real-time PCR的高品质预混液,主要用于cDNA和基因组DNA等的特异性超高灵敏度定量检测。由于使用的探针一般是TaqMan探针,所以本方法也常称作TaqMan探针法。

| 产品名称 | 英文名称 | 规格 |
| qPCR MasterMix(TaqMan探针法,高浓度ROX) | 2×ByFast Probe qPCR Mix(High ROX) | 1mL|5mL|25mL |
本产品特别适合用于低丰度或高特异性的目的基因的定量或定性检测。例如一些低丰度的mRNA、lncRNA、小RNA、微生物RNA反转录后的高灵敏度检测,一些相似度较高的常规染料法难以区分的同源基因或者基因的SNP检测。
本产品的特异性好、灵敏度高:特异性并不仅仅依赖于PCR引物,还依赖于探针的特异性,探针和目标基因发生特异性的结合和降解,才能生成荧光信号,检测灵敏度和特异性通常要显著高于使用SYBR Green等荧光染料的方法。
本产品可用于多重检测:单个反应孔中,不同基因对应不同探针,不同探针对应不同荧光标记,即可进行多重荧光定量PCR检测。经测试,在适当优化引物和探针后,本产品可同时用于2~3个基因的检测。
本产品使用的ByFast Taq DNA Polymerase是一种与抗体结合的高品质热启动酶,能够实现便捷高效的热启动。ByFast Taq DNA Polymerase中的Taq酶与抗Taq酶的单克隆抗体相互结合,从而抑制了Taq酶的DNA聚合酶活性,这样可以有效避免在低温条件下由引物和模板DNA非特异性退火或引物二聚体引起的非特异性扩增。在PCR反应的预变性步骤中抗体会被加热失活,这样可以确保仅在预变性后才会把Taq酶的活性释放出来,预变性之不会发生DNA聚合反应,从而大大提高了PCR反应的特异性、灵敏度和定量检测的准确性。
本产品包含了ByFast Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、dNTPs、稳定剂和镁离子等所有的通用组分,使操作更简单、使用更便捷。用户只需自备引物、探针、样品DNA和去离子水即可。
产品仅用于科研操作程序:
注意:重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗*:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
路路通酸 HPLC≥98% 20mg 犬脑素/脑尿肽(BNP)试剂盒 Canine brain naiuretic peptide,BNP ELISA Kit
律草酮 HPLC≥98% 10mg 英文名称HumanInsulin-likegrowthfactorbindingprotein1ELISAKit人胰岛素样生长因子结合蛋白1(IGFBP1)规格:96T/48T
绿原酸 HPLC≥98% 20mg 化人体RUNX3基因重组表达载体(pCMV5-RUNX3)测序引物对2OD
氯化两面针碱 HPLC≥98% 20mg RatHydrocoisone,HYDELISA试剂盒大鼠(HYD)ELISA试剂盒规格:96T/48T
氯化矢车菊素 HPLC≥98% 20mg 小鼠整合素αM(ITGαM)ELISA试剂盒 ,英文名: ITGαM ELISA Kit
天竺葵素(氯化花葵素) HPLC≥98% 10mg 内(ET)ELISA检测试剂盒Monkeyendotoxin,ETELISAKit 96T/48T
氯化缬草素 HPLC≥98% 0.1mL 犬内皮型合成酶(eNOS)试剂盒 Dog Endothelial niic oxide syhase,eNOS ELISA Kit
轮环藤碱 HPLC≥98% 20mg 英文名称HumanInsulin-likegrowthfactor2,IGF-IIELISAKit人胰岛素样生长因子2(IGF-2)规格:96T/48T
轮环藤宁 HPLC≥98% 20mg 化人体RUNX3基因重组表达载体(pGEFP-RUNX3)10微克
罗丹明B HPLC≥98% 20mg Rathydroxyproline,HypELISA试剂盒大鼠羟脯氨酸(Hyp)ELISA试剂盒规格:96T/48T
人成纤维细胞生长因子23(FGF23)酶联免疫吸附测定试剂盒 别称:FGF-23, ADHR, FGFN, HYPF, HPDR2, PHPTC Human FGF23(Fibroblast Growth Factor 23) ELISA Kit 用途 该试剂盒用于体外定量检测Human 血清,血浆或其他生物体液中天然及部分重组FGF23浓度
qPCR MasterMix(TaqMan探针法,高浓度ROX)人糖盏蛋白(GC)酶联免疫吸附测定试剂盒 别称:Carbohydrate-Rich Portion of Platelet Membrane Glycoprotein Ib Alpha Polypeptide Human GC(Glycocalicin) ELISA Kit 用途 该试剂盒用于体外定量检测Human 血清,血浆或其他生物体液中天然及部分重组GC浓度
热门标签:qPCR,MasterMix(TaqMan探针法,高浓度ROX)













