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Direct One Tube RT-PCR试剂盒
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/19 9:52:30
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详细内容
One-Tube RT-PCR(一管式RT-PCR)区别于传统的两步法（逆转录和PCR扩增分两步完成），RNA模板逆转录和cDNA扩增在一个管内完成，大大降低了污染的风险、缩短了分析时间并且提高了反应的重复性。One-Tube RT-PCR采用优化的缓冲液体系，高纯度酶，无DNA、RNA残留，逆转录酶选用高活性M-MLV 逆转录酶（RNase H-），PCR扩增选用热启动高保真KOD酶，明显减少错配。
| 产品名称 | 英文名称 | 规格 |
| Direct One Tube RT-PCR试剂盒 |
| 100次|500次 |
RT-PCR的产物可以通过琼脂糖凝胶电泳和EB染色进行分析，及下游的常规操作，如：限制性内切酶酶切、连接、DNA测序、dHPLC分析；或采用定量PCR仪进行qRT-PCR进行在线分析。
产品应用：
cDNA克隆（平末端连接、限制性酶切、琼脂糖凝胶电泳/EB染色、荧光毛细管电泳、DNA测序等）；
特别适合RNA的qRT-PCR分析；
RNA病毒或者RNA样品的定量或半定量分析。
产品优势：
（1）无需分管，简单方便、降低污染风险、缩短分析时间；
（2）反应所需的酶及其他出buffer以外的试剂为预混Mix，保证用量的准确性、方便操作；
（3）高活性和高稳定性的逆转录酶和DNA聚合酶，保证反应的高灵敏度和高特异性；
（4）DNA聚合酶选用热启动KOD，保真性比Taq酶高20倍以上（产物适合平末端连接）；
（5）特别适合RNA样品的定量或半定量分析。
保存条件：One-Tube RT-PCR kits可在-20℃下保存，有效期1年以上。
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Direct One Tube RT-PCR试剂盒快速蛋白裂解液25ml
快速蛋白裂解液50ml
快速蛋白裂解液100ml
细菌裂解液（免超声）50ml
细菌裂解液（免超声）100ml
产品仅用于科研操作程序：
注意：重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20－－30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗*：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲苯透明，封片。
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