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快速Pfu DNA聚合酶
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/19 9:52:30
FITC标记的酰基辅酶A硫酯酶8
FITC标记的自水解酶结构域5蛋白抗体
FITC标记的肝血管生成素相关蛋白4抗体
FITC标记的醛固酮还原酶家族1成员D1抗体
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详细内容
产品是通过采用分子进化技术对普通Pfu酶进行改造而获得的新型快速Pfu酶，是新一代的高保真DNA聚合酶。该酶解决了高保真PCR反应中Pfu酶扩增灵敏度低、延伸速度缓慢的难题，能够高效、快速扩增≤6kb片段目的基因片段（长可达20kb），模板低至0.05ng，并且在DNA末端补平、全基因合成、引入突变等之中有着很好的应用。
| 产品名称 | 英文名称 | 规格 |
| 快速Pfu DNA聚合酶 | Fast Pfu DNA Polymerase | 250U |
产品特点：
高保真：
保真度高于Pfu酶，为普通Taq酶的50倍。
快速高效：
Fast Pfu扩增速度为普通Pfu酶的数倍，72℃保温30可延伸1kb以上。扩增长度可达20kb，能高效扩增≤6kb片段。
高灵敏：
可从0.05ng人基因组DNA模板中扩增出1.2kb特定基因片段，扩增性能显著优于普通Pfu酶。
配方独特：
优化的Buffer，使PCR扩增反应更加稳定、灵敏、高效。
产品用途：
用于要求保真度比较高的PCR反应，包括克隆PCR、DNA片段拼接、引入突变、全基因合成、DNA末端补平等，也用于复杂模板，高GC/AT模板的扩增。
产品仅用于科研操作程序：
注意：重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20－－30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗*：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲苯透明，封片。
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