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2×快速高保真PCR预混反应液
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/19 9:52:30
FITC标记的兔抗大鼠IgG
FITC标记的小鼠抗羊IgG
FITC标记的兔抗羊IgG
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详细内容
本制品为Super HiFi DNA Polymerase的预混Mix形式。Super HiFi DNA Polymerase是通过定向分子进化技术开发得到的新型快速高保真DNA聚合酶，对DNA模板具有超强的亲和力，从而使得聚合酶的延伸速度可达15~30 sec/kb、模板延伸能力可达15kb，并能提高PCR反应的成功率、增加PCR扩增的产物量。此外，Super HiFi DNA Polymerase具有超强的3＇~5＇外切酶活性（Proofreading活性），保真性约为普通Taq DNA Polyme
图
| 产品名称 | 英文名称 | 规格 |
| 2×快速高保真PCR预混反应液 | 2×Super HiFi PCR MasterMix | 50μl×40次（不含染料)|50μl×200次（不含染料)|50μl×40次（含染料)|50μl×200次（含染料) |
本制品为一管式预混Mix形式，内含Super HiFi DNA Polymerase、超纯dNTP、MgCl2、反应缓冲液等PCR反应所需组分，只需加入模板和引物即可进行PCR扩增反应。除此之外，预混Mix中还整合了PCR反应增强系统，不但提高了预混Mix的稳定性，使得聚合酶对PCR反应抑制剂的耐受能力增强，还提高了Super HiFi DNA Polymerase对高GC含量模板的扩增能力，可扩增GC含量高达75%的模板。
本制品的PCR产物为平末端，可加A处理再与T载体连接或直接使用平末端克隆载体进行基因克隆，如我公司零背景快速连接试剂盒（目录号：WH0191）。
产品特点：
·扩增快速：延伸速度可达15~30 sec/kb。
·保真性高：保真性为普通Taq DNA Polymerase的50倍。
·延伸力强：可扩增长至15 kb的DNA片段。
·灵敏度高：模板用量可低至10pg。
·复杂模板：可成功扩增GC含量高达75%的DNA模板。
·操作简便：预混Mix形式，只需加入模板和引物即可进行PCR反应。
产品仅用于科研操作程序：
注意：重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20－－30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗*：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲苯透明，封片。
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