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Real-Time PCR预混反应液（探针法)
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/10/19 9:52:30
碱性磷酸酶（AP）标记的小鼠抗羊IgG
碱性磷酸酶（AP）标记的兔抗羊IgG
碱性磷酸酶（AP）标记的驴抗羊IgG
碱性磷酸酶（AP）标记的羊抗兔IgG
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详细内容
本制品是采用探针法进行Real-Time PCR的用试剂，为2×浓度的PreMix形式，反应液配制十分简单方便。采用了独特的双组分热启动DNA聚合酶进行PCR扩增，通过在PCR反应液中加入荧光探针，然后检测反应进程中的荧光强度，达到检测PCR产物扩增量的目的。采用SYBR Green I嵌合荧光法进行Real Time PCR时，建议使用SuperReal PreMix Plus （SYBR Green)（WH0103）
| 产品名称 | 英文名称 | 规格 |
| Real-Time PCR预混反应液（探针法) | SuperReal PreMix（Probe) | 125次|500次|5000次 |
本制品中双热启动酶构成了独特的酶活自动调节系统。酶活自动调节系统是由化学修饰的HotStar Taq DNA聚合酶和抗体修饰的Anti Taq DNA聚合酶组成。其中HotStar Taq DNA聚合酶占绝大部分比例，其聚合酶活性的激活是严格依赖于95℃高温的一个缓释过程，而Anti Taq DNA聚合酶则在95℃高温下完全激活。经过95℃条件下孵育15min激活大部分HotStar Taq DNA聚合酶，进入PCR循环后，每经过一轮95℃条件下变性，即可重新激活一部分HotStar Taq DNA聚合酶。HotStar Taq DNA聚合酶独特的酶活缓释机制使其可以与Anti Taq DNA聚合酶构成独特的酶活自动调节系统。PCR反应初期，完全激活的AntiTaq DNA聚合酶可以协同已经激活的HotStar Taq DNA聚合酶达到佳酶活状态，而在整个PCR反应过程中，每一轮新释放的HotStart Taq DNA聚合酶活力刚好可以弥补因热变性所导致的部分酶活损失。因此，SuperReal PreMix在整个PCR反应过程始终保持佳的DNA聚合酶活力，配合精心优化Buffer体系，从而具有定量准确，扩增效率高，重复性好和宽广的可信范围的特点。
本制品经过优化特别有利于Taq酶发挥其5′-3′外切酶活性，使荧光信号的释放达到佳的效果。此外，SuperRealPreMix（Probe)也充分降解了探针荧光淬灭基团的信号释放，经过上述优化，用相同量的模板将得到更强的信号。
产品特点：
· SuperReal PreMix （Probe)采用了独特的双组分热启动DNA聚合酶（化学修饰的HotStar TaqDNA聚合酶和抗体修饰的Anti Taq DNA聚合酶），从而构成酶活自动调节系统，配合精心优化的buffer体系，具有定量准确，扩增效率高，重复性好和宽广的可信范围的特点。
·本产品经过优化使荧光信号的释放达到佳的效果，同时充分降解了探针荧光淬灭基团的信号释放，用相同量的模板将得到更强的信号。
· SuperReal PreMix （Probe)为2×浓度的PreMix形式，PCR反应液配制时，只需加入模板、引物、灭菌蒸馏水便可进行Real Time PCR反应，操作简单方便。
·本产品附带ROX Reference Dye，用于消除信号本底以及校正孔与孔之间产生的荧光信号误差，方便客户针对不同型号荧光定量PCR仪时选择对应浓度使用。
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产品仅用于科研操作程序：
注意：重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20－－30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗*：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲苯透明，封片。
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