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当前位置:阿仪网>上海谷研实业有限公司>技术文章> 人总胆固醇ELISA血清样本处理避坑:溶血弃用与冻存复温要点

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人总胆固醇ELISA血清样本处理避坑:溶血弃用与冻存复温要点

点击次数:6 发布时间:2026/10/22 13:47:13

人总胆固醇ELISA样本处理中,溶血弃用和冻存复温是最容易踩坑的两个核心环节,直接决定结果是否有效。

溶血样本必须直接弃用的核心原因

溶血后红细胞释放大量内源性过氧化物酶,会直接和HRP标记物反应,引发非特异性显色,结果假阳性偏高。

中重度溶血样本没有任何有效补救方法,即便高速离心也无法清除这类干扰物质。

轻微溶血也不建议勉强上样,溶血程度超过0.5g/L血红蛋白时,偏差就会超出方法学允许范围。

冻存分装的避坑要点

分离后的血清必须按单次检测用量分装成50~100μL小份,避免整管反复冻融。

4℃短期存放不能超过5天,长期检测需置于-20℃或-80℃冻存,不可放在普通冰箱冷藏室长期留存。

冻融次数严格控制在≤2次,反复冻融会直接破坏脂蛋白结构,导致胆固醇检测结果系统性偏低。

复温操作的关键红线

冻存样本取出后‌室温自然解冻‌,禁止37℃以上水浴快速加热,避免脂蛋白变性失活。

完全解冻后轻缓上下颠倒混匀10~15秒,不要用高速涡旋仪剧烈震荡,防止产生气泡引入误差。

复温完成后1小时内必须上样检测,不要再次放回冻存环境,二次冻存的样本结果完全不可靠。

配套通用避坑细节

样本中绝对不能加入叠氮钠,它会完全抑制HRP酶活性,直接造成假阴性结果。

浑浊脂血样本检测前需5000×g离心5分钟,去除脂蛋白沉淀后再上样。

所有冻存样本要做好标记,记录冻存时间和剩余冻融次数,避免超期使用。


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