小鼠雄烯二酮(ASD)ELISA试剂盒操作步骤:
1. 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在di一、第二孔中分别加标准品100μl,然后在di一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从di一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为180 ng/L,120 ng/L ,60 ng/L,30 ng/,15 ng/L)。
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30后弃去,如此重复5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同3。
8. 洗涤:操作同5。
9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟。
小鼠抑制素B(mouse Inhibin B)
小鼠IP-10(mouse IP-10)
小鼠8异列腺素(mouse 8-iso-PG)
小鼠白三烯B4(mouse LTB4)
小鼠瘦素(mouse Leptin)
小鼠瘦素受体(mouse Leptin receptor)
小鼠促黄体生成激素(mouse LH)
小鼠溶菌酶(mouse Lysozyme)
小鼠巨嗜细胞趋化蛋白-1(mouse MCP-1)
小鼠MCP-3(mouse MCP-3)
小鼠M-胆碱能受体结合力(mouse MCBC)
小鼠巨噬细胞来源的趋化因子(mouse MDC)
小鼠髓过氧化物酶(mouse MPO)
小鼠粘蛋白(mouse MUC5AC)
小鼠肌肉生成抑制素(mouse Myostatin)
小鼠巨噬细胞游走抑制因子(mouse MIF)
小鼠巨嗜细胞炎性蛋白-1(mouse MIP-1)
小鼠巨嗜细胞炎性蛋白-2(mouse MIP-2)
小鼠巨嗜细胞炎性蛋白-3a(mouse MIP-3a)
小鼠巨嗜细胞炎性蛋白-3β(mouse MIP-3β)
小鼠巨嗜细胞炎性蛋白-1a(mouse MIP-1a/CCL3)
小鼠基质金属蛋白酶-1(mouse MMP-1)
小鼠基质金属蛋白酶-2(mouse MMP-2)