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植物活性氧(ROS)ELISA试剂盒操作步骤

点击次数:3884 发布时间:2019/12/25 16:05:45

植物活性氧(ROS)elisa试剂盒操作步骤

1. 标准品的加样:设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;。
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 加酶:每孔加入酶标试剂100μl,空白孔除外。
4. 温育:用封板膜封板后置37℃温育60分钟。
5. 配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。
6. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
7. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
8. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
9. 测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
样品活化方法
生物样品中的通常以无活性的形式存在,在检测指标活性前必须进行活化处理。
活化方法如下:
血清、血浆: 280 μL标准品&样品稀释液中加入40 μL样品,混匀,加入40 μL活化试剂1,室温孵育10分钟。再加入40 μL活化试剂2,混匀后立即检测。
注意:样品被稀释了10倍!
细胞培养上清:20 μL标准品&样品稀释液中加入100 μL样品,混匀,加入40 μL活化试剂1,室温孵育10分钟。再加入40 μL活化试剂2,混匀后立即检测。
注意:样品被稀释了2倍!
组织匀浆:1960 μL标准品&样品稀释液中加入40 μL样品,混匀后检测。
注意:样品被稀释了50倍!

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