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技术文章
甲硝唑ELISA检测试剂盒简介
点击次数：282 发布时间：2026/8/26 17:14:37
甲硝唑快速检测试剂盒
（血液）使用说明书
【原理】
本试剂盒是利用竞争ELISA方法，在酶标板微孔上预包被抗 甲硝唑抗原。检测时，加入标准品或样品溶液，甲硝唑抗体及酶标记物，包被抗原和加入样本中的甲硝唑竞争性地与甲硝唑抗体结合后，再与酶标记物形成抗原抗体复合物，用TMB底物显色；加入反应终止液，在450nm波长酶标仪下进行检测，样品中的甲硝唑浓度与吸收光强度成反比。
【适用范围】
本试剂盒是应用ELISA技术研发的药物残留检测产品,与仪器分析技术比较，能经济、快速地检测出肌肉、肝脏等中的甲硝唑类药物。
【【试剂盒技术指标】
规 格：96孔/盒
灵敏度： 0.1ppb
检测时间：45min
样本定量检测下限：
血 液………………………………………2ppb
样本回收率
血 液…………………………………80±15%
交叉反应率
甲硝唑………………………………………………100%
【试剂盒组成】
1、 微量测试孔：（1X96孔板）每条8孔，一板12条
2、 标准液X6瓶：（1ml/瓶） 0ppb、0.1ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb
3、 高浓度标准品×1瓶：（1ml/瓶）100ppb
4、 酶标记物 7ml…………………………红色帽
5、 抗体工作液 7ml…………………………绿色帽
6、 底物液A液 7ml…………………………棕色帽
7、 底物液B液 7ml…………………………黑色帽
8、 终止液 7ml…………………………黄色帽
9、 20X浓缩洗涤液40ml…………………… 白色帽
10、 2X浓缩复溶液50 ml ………………… 蓝色帽
【所用仪器、试剂】
具备的仪器：微孔酶标仪、打印机、均质器、氮气吹干装置、振荡器、离心机、刻度移液管、天平（感量0.01g）
微量移液器：单道20µl-200µl、100µl-1000µl，多道250µl
试 剂：去离子水
【实验前溶液配制】
样本处理前需配制：
配液1、1×复溶液：
将2×浓缩复溶液用去离子水以1：1稀释（1份1×浓缩复溶液+1份去离子水），用于样本提取和稀释。
配液2、将40ml浓缩洗涤液（10倍浓缩）用去离子水按照1：9稀释（1份浓缩洗涤液+9份去离子水），或按所需用量配制洗涤液。
【样本前处理方法】
样本前处理步骤
（a）血液样本的处理
1、取出50μL血液+450μL的1×复溶液液混合30s；
2、取50µl液体用于分析。
样本稀释倍数：10倍
【酶标免疫分析程序】
操作步骤：
1、 从4℃冷藏环境中取出所需试剂，置室 温（20-25℃）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
2、 取出框架及需要数量的微孔，将不用的微孔放入自封袋，保存于2-8℃。
3、 编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置
4、 加标准品或样本50µl/孔到各自的微孔中，然后加入酶标记物50µl/孔后再加抗体50µl/孔，用盖板膜封板，轻轻振荡混匀。25℃环境中反应30min。
5、 取出将孔内液体甩干，用洗液250µl /孔，洗板4－5次，每次间隔15-30s，用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头刺破）。
6、 显色：每孔加入底物液A液50µl，再加B液50µl，轻轻振荡混匀，25℃环境中避光显色15min。
7、 测定：每孔加入终止液50µl，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处（建议用双波长450/630nm检测，在5min内读完数据），测定每孔吸光度值（OD值）。
【结果判定】
结果判定有两种方法，粗略判定可用第1种方法，定量判定用第2种方法。注意样本吸光值与甲硝唑的含量成负相关。
1、粗略判定：
用样本的平均吸光度值与标准吸光度值比较即可得出其浓度范围(ppb)。假设样本1的吸光度值为0.310， 样本2的吸光度值为0.820，标准液吸光度值分别是：0ppb为1.610；0.1ppb为1.350；0.3ppb为1.030；0.9ppb为0.660；2.7ppb为0.379；8.1ppb为0.198。则样本1的浓度范围是2.7ppb-8.1ppb； 样本2的浓度范围是0.3ppb-0.9ppb。乘以其对应的稀释倍数即为样本中甲硝唑的实际含量。
2、定量判定：
所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的平均值（B）除以个标准（0标准）的吸光度值（B0）再乘以100%，即百分吸光度值。
百分吸光度值（%）＝ | B | ×100% |
B0 |
B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值
B0—0ng/ml标准溶液的平均吸光度值
以标准品百分吸光率为纵坐标，以甲硝唑标准品浓度（ng/ml）的半对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中甲硝唑实际浓度。
若利用试剂盒专业分析软件进行计算，更便于大量样品的准确、快速分析。
3、标准准曲线：
B/B0 (%)
0.1 0.3 0.9 2.7 8.1 甲硝唑(ppb)
图1：甲硝唑检测试剂盒的回归曲线
4、再现性：
%CV
0 0.1 0.3 0.9 2.7 8.1
甲硝唑(ppb) [µg/kg]
图2：甲硝唑检测试剂盒的精密度
由多个不同的实验结果确定了精密度，图2显示出甲硝唑检测试剂盒的精密度情况，获得的标准吸收值的变异系数（%CV）对相应甲硝唑浓度作曲线，可以看到全部范围内变异系数如此之低，可以得到很好的再现性。
【注意事项】
1、 使用前将所有试剂温度回升至室温20-25℃。试剂及标本没有回到室温（20-25℃）会导致所有标准的OD值偏低。
2、 在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会伴随着出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。
3、 混合要均匀，否则会出现重复性不好的现象。
4、 反应终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。
5、 不要使用过了有效日期的试剂盒，稀释或搀杂使用会引起灵敏度、OD值的变化。不要交换使用不同批号的盒中试剂。
6、 不用的微孔板放进自封袋密封；标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。
7、 显色液若有任何颜色表明变质，应当弃之。0标准的吸光度值小于0.5个单位（A450nm< 0.5）时，表示试剂可能变质。
8、 该试剂盒最佳反应温度为25℃，温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。
【储存】
原包装应储存于2～8℃保鲜冷藏，切勿冷冻。
【有效期】
有效期12个月;生产日期、有效期、生产批号见外包装。
原创作者：上海臻科生物科技有限公司
